DNA復(fù)溶液，作為分子生物學(xué)實驗中的關(guān)鍵試劑，其穩(wěn)定性和保存條件對于實驗結(jié)果具有直接影響。正確保存DNA復(fù)溶液，不僅可以確保其活性與完整性，還能提高實驗效率，減少實驗誤差。本文旨在探討DNA復(fù)溶液的保存策略與實踐，為科研工作者提供實用指導(dǎo)。一、DNA復(fù)溶液的基本特性DNA復(fù)溶液通常指將純化的DNA片段溶解于特定緩沖液中形成的溶液。這些緩沖液通常包含pH穩(wěn)定劑、鹽類以及可能的DNA穩(wěn)定劑，如E...
當(dāng)廚師開發(fā)出一種新食譜時，他們會有條不紊地添加和刪除各種食材，看看每一種食材如何改變最終的菜肴。當(dāng)科學(xué)家試圖了解基因在體內(nèi)的作用時，他們采用了類似的策略，即基因組編輯。目前，他們工具箱中***的工具是CRISPR，其應(yīng)用范圍從癌癥治療到鐮狀細胞性貧血和β-地中海貧血等遺傳性疾病的治療然而，這種基因組編輯主食仍有其局限性。維爾紐斯大學(xué)的基因組生物學(xué)家Tautvydas Karvelis說：“將...
在PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）中，引物是啟動DNA復(fù)制的關(guān)鍵組成部分。引物的設(shè)計至關(guān)重要，其長度是一個需要仔細考慮的因素。如果PCR引物過長，可能會導(dǎo)致以下一系列問題：特異性降低：引物越長，能夠配對的概率理論上會減少，但同時引物與非目標序列的匹配機會也會增加，這可能導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的非特異性擴增。非特異性擴增會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的雜交、非特異性條帶或假陽性等問題，從而影響結(jié)果的準確性。擴增效率降低：長...
在生物制品和細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制中，支原體檢測是重要的一環(huán)。傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括培養(yǎng)法和DNA染色法，然而，隨著技術(shù)的進步，核酸擴增技術(shù)（NAT）因其快速、靈敏和便捷的特點，逐漸受到行業(yè)內(nèi)的青睞。NAT法在藥典中的使用并非毫無限制，其檢測限的設(shè)定，成為了一個重要的考量因素。 NAT法檢測限的設(shè)定背景NAT法，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和實時熒光定量PCR（qPCR），通過擴增支原體的特定...
2024年10月22日，方顯楊研究員在《Current Opinion in Structural Biology》期刊在線發(fā)表了題為"Empowering the molecular ruler techniques with unnatural base pair system to explore conformational dynamics of flaviviral RNAs"的...
CFU（Colony Forming Unit）即菌落形成單位，是微生物學(xué)中用來估算樣品中活的細菌或真菌細胞數(shù)量的單位。CFU測定在多種情況下被廣泛應(yīng)用，以下是CFU測定的主要應(yīng)用場景：一、食品科學(xué)在食品科學(xué)中，CFU的測定對于評估食品的衛(wèi)生質(zhì)量、判斷食品是否受到污染以及預(yù)測食品的保質(zhì)期等方面具有重要意義。通過測定食品樣本中的CFU數(shù)量，可以了解食品中微生物的分布和活性水平，從而判斷食品是否...
植物由于固著生長的特性，在生長發(fā)育過程中會面臨多種環(huán)境變化。為了適應(yīng)復(fù)雜的外界環(huán)境，植物進化出一系列精密的機制。在逆境條件下，植物往往犧牲自身的生長以增強生存能力。通過調(diào)控生長發(fā)育及脅迫響應(yīng)相關(guān)基因的表達，植物能夠更有效地適應(yīng)外部環(huán)境變化，實現(xiàn)生長與脅迫響應(yīng)之間的平衡。過去的研究主要集中在轉(zhuǎn)錄水平，然而其中的翻譯調(diào)控機制仍知之甚少。核糖體作為細胞內(nèi)的翻譯機器，是蛋白質(zhì)合成的重要場所，且容易受...
近年來，生物醫(yī)藥領(lǐng)域取得了飛速進步，細胞治療等項目已成為該領(lǐng)域的焦點。與此同時，為確保生物制品的安全性和可靠性，各國法規(guī)及相關(guān)監(jiān)管機構(gòu)正不斷強化對其的監(jiān)督力度。其中，一個關(guān)鍵的問題就是“如何對生物制品進行檢測，以確保產(chǎn)品的生物安全”。對于涉及細胞培養(yǎng)的生物制品生產(chǎn)工藝，各國法規(guī)均明確規(guī)定了相應(yīng)的檢測標準與要求。
歐洲藥典（EP）和日本藥典（JP）中規(guī)定的生物制品支原體檢測的方法主要包括...
支原體污染細胞后的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測方法：試劑盒檢測法：使用專門用于支原體檢測的試劑盒，通過細胞滴片進行檢測。此方法簡便快捷，是常用的初步篩選手段。觀察細胞形態(tài)和生長特征：在支原體污染較嚴重時，可觀察到細胞生長減慢，培養(yǎng)基pH變酸，并出現(xiàn)細胞病變。但由于支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能作為**診斷依據(jù)。分離培養(yǎng)法：從可疑的細胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到最適宜支...
小牛血清在某些情況下可以代替胎牛血清進行細胞培養(yǎng)，但需要考慮多種因素。以下是對兩者在細胞培養(yǎng)中應(yīng)用的詳細比較：一、來源與成分胎牛血清：來源：從未接觸外界環(huán)境的胎牛體內(nèi)提取。成分：富含蛋白質(zhì)、氨基酸、脂質(zhì)、糖類等多種營養(yǎng)物質(zhì)，以及多種生長因子和激素，如胰島素樣生長因子、表皮生長因子等。小牛血清（通常指犢牛血清）：來源：取自新生牛（小牛）的血。成分：雖然也含有一定的營養(yǎng)成分和生長因子，但可能略遜...
在人類中，主要的分子能量載體是三磷酸腺苷（ATP）。它對整個身體的細胞功能，尤其是大腦的細胞功能至關(guān)重要。它的合成發(fā)生在線粒體中，通過氧化磷酸化（OXPHOS）是一個復(fù)雜的，多步驟的過程。當(dāng)這一過程中的一個或多個要素發(fā)生故障時，可能導(dǎo)致ATP產(chǎn)生不平衡或活性氧（ROS）過量產(chǎn)生。這可能導(dǎo)致包括蛋白質(zhì)和DNA在內(nèi)的幾種細胞生物分子的氧化損傷，最終可能導(dǎo)致細胞死亡。在大腦中，這種不平衡會導(dǎo)致問題...
CFU，全稱Colony Forming Unit，即菌落形成單位，是微生物學(xué)中用于估算細菌、真菌等微生物數(shù)量的一個單位。它代表在特定條件下（如特定的培養(yǎng)基、溫度、濕度等），一個單位的體積（如1毫升或1克）的樣品經(jīng)過培養(yǎng)后，能夠形成的肉眼可見的菌落數(shù)量。CFU/ml這一術(shù)語用于描述在特定體積（如1毫升）的液體樣品中，通過培養(yǎng)所能形成的菌落數(shù)量。簡而言之，CFU/ml代表了每毫升菌液中微生物的...
支原體標準品在支原體檢測過程中，特別是在定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qPCR）檢測中，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。以下是對支原體標準品作用的詳細闡述：一、驗證檢測方法的準確性和可重復(fù)性支原體標準品是已知濃度的支原體樣本，通常包含特定支原體物種的基因組DNA，并經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制和驗證。在qPCR檢測中，支原體標準品作為已知濃度的參考樣本，可用于驗證實驗室分析方法的準確性和可重復(fù)性。通過與標準品進行對比，實...
動物細胞培養(yǎng)時，血清起著至關(guān)重要的作用。具體來說，血清在動物細胞培養(yǎng)中的作用主要包括以下幾個方面：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：血清中含有豐富的蛋白質(zhì)（如白蛋白和球蛋白）、氨基酸、葡萄糖等，這些都是細胞生長和增殖所必需的基本營養(yǎng)物質(zhì)。其中，氨基酸是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，有些氨基酸是動物細胞本身不能合成的，必須由培養(yǎng)液提供。提供激素和各種生長因子：血清中含有多種激素，如胰島素、生長激素等，以及多種生長...
在生物技術(shù)和制藥領(lǐng)域，細胞和生物制品的支原體污染是一個需要高度關(guān)注的問題。支原體是一類微小的原核生物，其污染可能導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量下降，甚至引發(fā)嚴重的安全問題。因此，歐洲藥典（EP）和日本藥典（JP）都對細胞和生物制品的支原體檢測做出了詳細的規(guī)定，并強調(diào)了方法學(xué)驗證的重要性。支原體檢測的描述歐洲藥典和日本藥典均指出，無論是生物源性原材料、采用細胞培養(yǎng)技術(shù)制備的疫苗、抗體，還是細胞或基因治療產(chǎn)品，在...
qPCR（熒光定量PCR）檢測中出現(xiàn)“None”的情況，可能由多種原因?qū)е?。以下是一些可能的原因及其解釋?擴增曲線異常：如果擴增曲線不正常，CT值可能顯示“Undetermined”，進而在結(jié)果中表現(xiàn)為“None”。這可能是由于多種因素導(dǎo)致的擴增失敗，如引物設(shè)計不合理、模板質(zhì)量差、反應(yīng)條件不適宜等。 熒光信號未采集：在每個擴增循環(huán)結(jié)束后，如果沒有設(shè)置熒光信號的收集步驟，那么儀器將無法檢測到...
細胞房支原體污染確實存在傳染的風(fēng)險。支原體是一種細菌樣微生物，細胞內(nèi)寄生體，可以感染人類和動物，引起多種疾病。它們具有高度的傳染性和致病性，可以通過多種途徑進行傳播。在細胞培養(yǎng)環(huán)境中，支原體污染可能通過直接接觸受污染的細胞培養(yǎng)物、使用被支原體污染的器材或試劑，以及空氣傳播等方式進行傳染。此外，如果實驗室人員未嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，也可能將支原體帶入細胞培養(yǎng)環(huán)境中，從而引發(fā)污染。對于人體而言，...
慢病毒載體作為一種重要的基因轉(zhuǎn)移工具，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價值。其高效感染、穩(wěn)定整合、安全性和表達可調(diào)等特點，使其在疾病治療、基因改造等多個方面表現(xiàn)出優(yōu)越性。然而，慢病毒載體的檢測卻面臨諸多挑戰(zhàn)，尤其是在靈敏度、準確性和定量性方面的要求極高。在這一背景下，數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)因其獨特的優(yōu)勢，成為慢病毒載體檢測的理想選擇。dPCR是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其基本原理是將含有DNA模...
DNA提取在PCR實驗中至關(guān)重要。以下是對其重要性的詳細分析：一、提高PCR反應(yīng)的靈敏度通過細胞裂解和DNA提取，可以將DNA從細胞中釋放出來并純化。這一步驟確保了PCR反應(yīng)能夠檢測到微量的DNA樣本，從而提高了PCR反應(yīng)的靈敏度。這使得PCR技術(shù)能夠應(yīng)用于更多需要高靈敏度的場景，如疾病診斷、遺傳病篩查等。二、保證PCR反應(yīng)的特異性細胞內(nèi)的其他成分，如蛋白質(zhì)、RNA等，可能會與PCR引物結(jié)合...
胎牛血清在細胞培養(yǎng)中扮演著至關(guān)重要的角色，其安全性直接影響到實驗結(jié)果的準確性和可靠性。病毒檢測是確保胎牛血清安全性的重要環(huán)節(jié)，以下是對胎牛血清病毒檢測與安全性的詳細分析：一、胎牛血清的病毒檢測檢測內(nèi)容：胎牛血清的病毒檢測通常涵蓋一系列可能存在的病毒，如牛副流感3型病毒（PI-3）、牛病毒性腹瀉病毒（BVD）、牛細小病毒等。這些病毒一旦存在于血清中，將對宿主細胞造成嚴重的損害，甚至威脅實驗人員...
培養(yǎng)基是否需要避光儲存？培養(yǎng)基不可以經(jīng)陽光暴曬，短暫的照射燈光不會有明顯危害。一、培養(yǎng)基避免暴曬儲存和使用的必要性1. 防止成分降解：培養(yǎng)基中的某些成分，如維生素、氨基酸等，在光照下容易發(fā)生降解，導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)的濃度下降。這些成分對細胞的生長和繁殖十分重要，因此避光儲存和使用可以確保這些成分保持較高的濃度，為細胞提供充足的營養(yǎng)支持。2. 避免細菌污染：光照還可能促進某些細菌的生長，這些細菌可能...
大阪大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)，“腸道監(jiān)視”細胞中的GPR31路徑檢測細菌代謝物并觸發(fā)免疫反應(yīng)，為藥物開發(fā)、疫苗和益生菌對抗感染開辟了新的可能性。人體腸道是有益微生物的家園，這些微生物被稱為微生物群，它們產(chǎn)生被稱為代謝物的分子。人們越來越認識到這些代謝物在支持我們健康方面的作用。我們體內(nèi)的一組蛋白質(zhì)，被稱為G蛋白偶聯(lián)受體（GPCRs），可以檢測這些代謝物，并觸發(fā)重要的免疫反應(yīng)和其他途徑。然而，目前尚...
qPCR（實時熒光定量核酸擴增檢測）檢測試劑盒的檢測限因試劑盒類型、目標病原體或污染物以及制造商的不同而有所差異。以下介紹的是大多數(shù)單位用的德國MB qPCR檢測試劑盒及其檢測限的概述： 支原體qPCR檢測試劑盒涵蓋范圍：高特異性的德國MB qPCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種，包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體，甚至能檢測到至少107種支原體物種。 檢測限：經(jīng)典法：MB...
“10CFU/100ml”這一標準的制定涉及多個方面，包括藥品和水的微生物控制標準等。以下是對該標準制定過程的詳細解釋：一、背景在藥品和水的生產(chǎn)過程中，微生物的控制至關(guān)重要。為了確保產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，各國藥典和相關(guān)機構(gòu)都制定了嚴格的微生物控制標準。其中，“10CFU/100ml”這一標準在多個領(lǐng)域都有應(yīng)用。二、制定過程藥典標準：在藥品生產(chǎn)領(lǐng)域，特別是無菌制劑的生產(chǎn)中，微生物的控制標準非常嚴...
在體外細胞培養(yǎng)過程中，濕度是一個至關(guān)重要的環(huán)境因素，對細胞的生長、形態(tài)維持及功能發(fā)揮具有深遠的影響。細胞培養(yǎng)環(huán)境的濕度控制不僅涉及水分的保持，還關(guān)系到培養(yǎng)箱內(nèi)氣體交換的平衡，以及細胞與外界環(huán)境的相互作用。本文將詳細探討體外培養(yǎng)細胞對濕度的具體要求及其重要性。一、濕度對細胞生長的影響細胞在體外培養(yǎng)時，適宜的濕度有助于維持其正常的生理功能和代謝活動。濕度過低會導(dǎo)致培養(yǎng)液快速蒸發(fā)，不僅影響培養(yǎng)液的...
