qPCR檢測中出現“None”是哪些原因導致的

qPCR（熒光定量PCR）檢測中出現“None”的情況，可能由多種原因導致。以下是一些可能的原因及其解釋：

擴增曲線異常：

如果擴增曲線不正常，CT值可能顯示“Undetermined”，進而在結果中表現為“None”。這可能是由于多種因素導致的擴增失敗，如引物設計不合理、模板質量差、反應條件不適宜等。

熒光信號未采集：

在每個擴增循環結束后，如果沒有設置熒光信號的收集步驟，那么儀器將無法檢測到熒光信號，從而在結果中顯示為“None”。

ROX參比染料問題：

ROX是一種在qPCR反應中常用的參比染料，其熒光信號并不隨著PCR擴增而增強。如果選用了不含ROX的預混液或者不希望使用ROX校正，但軟件仍然默認檢測ROX并使用均一化數據，那么可能會導致數據不準確，甚至在結果中顯示為“None”。此時，可以在分析設置中將參比熒光染料選項改為“None”，再重新分析。

系統界面參數設置錯誤：

如果系統界面的參數設置錯誤，如將無樣品的孔也設置了target和sample參與CT值計算，那么可能會導致CT值錯誤或無法計算，從而在結果中顯示為“None”。此時，需要檢查并修改系統界面的參數設置。

耗材或儀器問題：

使用了透光性不好的PCR耗材或不配套的耗材，或者儀器本身存在問題，如需要校準等，也可能導致熒光信號檢測不準確或無法檢測，從而在結果中顯示為“None”。

模板濃度問題：

如果模板濃度過低，那么可能需要更多的循環數才能達到熒光閾值線，甚至可能無法達到。這可能導致CT值偏大或無法計算，從而在結果中顯示為“None”。此時，可以嘗試增加模板量或優化模板提取過程。

綜上所述，QPCR檢測中出現“None”的原因可能涉及多個方面，包括擴增曲線異常、熒光信號未采集、ROX參比染料問題、系統界面參數設置錯誤、耗材或儀器問題以及模板濃度問題等。為了解決這個問題，需要仔細檢查實驗步驟和條件，并逐一排查可能的原因。