處理細胞培養支原體污染的方法

細胞培養中出現支原體污染是一個常見但嚴重的問題，它會影響細胞的生長速度、形態以及實驗結果的準確性和可靠性。以下是一些處理細胞培養支原體污染的方法：

一、識別污染

需要識別是否存在支原體污染。支原體污染通常表現為細胞生長緩慢、形態異常、培養基變渾濁以及出現小點狀雜質等現象。當發現這些異常時，應懷疑是否存在支原體污染，并可以通過以下方法進行檢測：

PCR檢測：通過聚合酶鏈式反應來檢測支原體DNA的存在。可使用德國MB 常規PCR檢測試劑盒快速檢測支原體。

熒光顯微鏡觀察：使用熒光標記的抗體來檢測支原體。

培養檢測：將疑似污染的細胞培養物接種在特定的培養基上，觀察是否有支原體生長。

二、清理污染

一旦確認存在支原體污染，應立即采取措施進行清理：

隔離受污染的細胞系：將受污染的細胞系與其他細胞系隔離，避免污染進一步擴散。

徹底清洗孵箱：關閉細胞孵箱，將所有細胞培養物移出，并使用70%的酒精或專用清潔劑對孵箱內部進行徹底清洗，確保無死角。加入WaterShield?水槽支原體預防試劑可用于常規水浴環境、常規二氧化碳細胞培養箱中的水槽，并與常見的實驗室表面兼容，例如鍍錫鐵，鉻，鎳鋼，高等級鋼和銅。對大多數細菌、支原體、原生動物、藻類、真菌和酵母都有活性。WaterShield?水槽支原體預防試劑可防止這些微生物在水浴環境下生長。

妥善處理移出的細胞培養物：對移出的受污染細胞培養物進行妥善處理，如高溫高壓滅菌或專門的廢棄物處理，以避免交叉污染。

三、消毒處理

清洗完成后，應對細胞孵箱和實驗室環境進行消毒處理，以徹底消除支原體污染。常用的消毒方法有：

紫外線照射：使用紫外線燈對細胞孵箱和實驗室環境進行照射，以殺滅支原體。

臭氧消毒：利用臭氧的強氧化性來殺滅支原體。

甲醛熏蒸：使用甲醛進行熏蒸消毒，但需注意甲醛的毒性和殘留問題。

四、驗證消毒效果

消毒完成后，應對細胞孵箱和實驗室環境進行驗證，以確保支原體污染已被徹底消除。可以通過以下方法進行驗證：

再次進行PCR檢測：檢測消毒后的細胞孵箱和實驗室環境中是否存在支原體DNA。

培養檢測：將消毒后的細胞培養物接種在特定的培養基上，觀察是否有支原體生長。

五、預防再次污染

為了預防支原體污染的再次發生，應采取以下措施：

嚴格規范實驗操作：遵循實驗室清潔和消毒程序，每次實驗操作完成后及時清理實驗臺面，確保沒有殘留物或廢棄物。

使用合格的器皿：選擇高質量的器皿和耗材，避免使用有破損或污染的器皿。

防止空氣污染：確保空氣潔凈度，使用空氣過濾器和生物安全柜來提高空氣質量。

嚴格控制實驗室人員的衛生：實驗室人員應保持良好的個人衛生，實驗前要洗手、消毒，穿戴適當的防護服。

定期檢測微生物污染風險：定期對實驗室環境和設備進行檢測，以確保沒有微生物滋生。

綜上所述，處理細胞培養支原體污染需要采取一系列措施，包括識別污染、清理污染、消毒處理、驗證消毒效果以及預防再次污染。這些措施的實施將有助于確保細胞培養的質量和實驗結果的準確性。