病毒檢測Kit （RT-qPCR法）（新冠病毒推薦）
ConviFlex? RT-Taq Mix
品名 | 貨號 | 規格 | 存儲 |
病毒檢測Kit（RT-qPCR法）（新冠病毒推薦） 英文名：ConviFlex? RT-Taq Mix 品牌：德國MB（Minerva Biolabs） | 192-0025 192-0100 192-0250 | 25次/盒 100次/盒 250次/盒 | 2-8°C 凍干粉復溶后在 ≤-18°C保存 |
一、產品用途：
病毒檢測Kit （RT-qPCR法）（新冠病毒推薦））（英文名：ConviFlex RT-Taq Mix）用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子，特別適合檢測新冠病毒等此類病毒。
二、產品描述：
1. 該試劑盒為實時定量qPCR（RT-qPCR）RNA病毒檢測試劑盒。
2. 試劑盒由兩種組分組成：
組分1. ConviFlex? RT-Taq Mix （凍干粉，紅蓋） | 組分2. 2×Rehydration Buffer （復溶緩沖液，1.5ml/管，藍蓋） | 規格 | 貨號 |
1管 | 1管 | 25次/盒 | 192-0025 |
4管 | 1管 | 100次/盒 | 192-0100 |
10管 | 2管 | 250次/盒 | 192-0250 |
組分
1.ConviFlex? RT-Taq Mix的凍干粉包含：MuLV逆轉錄酶、Taq聚合酶及dNTP。其中MuLV逆轉錄酶，來自小鼠白血病病毒（M-MuLV）并經過基因修飾。這里的Taq聚合酶另兼具熱啟動功能。
此Taq酶在室溫下，活性被抗體所抑制，當溫度達到70°C以上時，才會被完全激活。
2.在70°C 以下時，由于Taq酶沒有完全活化，因此實驗不會產生非特異性PCR產物和引物二聚體。熱啟動Taq酶的使用可使PCR具有更高的特異性和靈敏度。
3.試劑盒使用時，先用復溶緩沖液溶解凍干粉，再加入自備的RNA模板和引物。
推薦使用MB公司提供的新冠病毒的引物/探針（英文名：SARS-CoV-2 Confirm，
貨號271-2100）
4.該試劑盒適合大多數RT-qPCR體系和qPCR儀類型。關于實驗使用的**體積、濃度、溫度和孵育時間，本文有相應的建議，但實驗室仍可依據自己的分析要求作相應調整。
三、產品特點：
1.凍干粉為逆轉錄酶和Taq酶的預混液，將RNA逆轉錄與qPCR擴增兩個過程合并，一步完成，減少移液次數、避免交叉污染、操作簡單，節約時間。
2.Taq酶具有70°C熱啟動功能，顯著提高試劑盒的特異性和敏感度。
3.主要組分為凍干粉，4℃保存，儲存運輸方便，性能穩定。
四、需用戶自己準備的試劑耗材和儀器：
1.引物、探針（可選）
推薦MB公司提供的新冠病毒的引物/探針（英文名：SARS-CoV-2 Confirm，
貨號271-2100）
2.熒光定量PCR儀（qPCR儀）
3.無DNase和RNase的qPCR反應管
4.離心機
5.移液器及帶濾芯吸頭（不含DNase和RNase）
6.用戶自己的樣品。
五、樣本制備說明：
1.來自于真核細胞、原核細胞、病毒的RNA以及體外轉錄的RNA，均可用于檢測。
2.制備的RNA必須不含RT-qPCR抑制劑，例如有機溶劑等。
3.盡量減少RNA樣品的凍融次數，同時避免RNA酶污染，以減少RNA降解的風險。（RNA降解會極大地限制了RT-qPCR反應的性能）
4.樣本制備過程中，注意避免其他DNA的污染，DNA的干擾也會降低qPCR的準確性。
建議采用商品化的RNA提取試劑盒預先處理待檢物（如拭子、活檢組織、哺乳動物細胞和細菌），例如MB廠家的
【RNA小提試劑盒】（英文名：ExtractNow? RNA Mini Kit，貨號603-1050）
【病毒RNA提取試劑盒】
(英文名：ExtractNow? Virus RNA Kit, 貨號611-1010/-1050/-1250)
或使用其他已建立的方法。
六、操作注意事項：
該試劑盒應僅由經過培訓的實驗室人員使用。始終穿上合適的防護服和戴一次性手套。
根據樣品類型，應謹慎處理所有樣品。 該試劑盒不含有害物質。殘余物可以根據當地法規丟棄。
七、操作步驟
步驟1.凍干粉ConviFlex?RT-Taq Mix，**速離心5秒鐘，然后加入260μl復溶緩沖液2×Rehydration Buffer，室溫靜置5分鐘后，渦旋并離心5秒鐘，分裝，待用或-18℃保存。
步驟2.每個反應體系為20μl，其中反應mix為15μl。
（1）依據本次試驗樣本數，制備RT-qPCR的反應mix。
1個反應mix需要：
①ConviFlex? RT-Taq Mix（即上面復溶的預混液）10μl，
②引物（濃度0.1 - 0.5 μM）
③探針（濃度0.1 - 0.5 μM）
④PCR級水（使每管總體積為15μl）
注：引物和探針的推薦濃度范圍是0.1-0.5 μM。
通常，引物濃度過高，會增加引物錯配和非特異RT-PCR產物。然而，當RT-PCR程序運行時間較長或使用簡并引物時，則推薦引物濃度升高至1 μM。（注意：若使用簡并引物，同一RT-PCR分析中，引物之間應具有相同的熔解溫度）
（2）將反應mix渦旋并離心5秒鐘。
（3）每個PCR管中加入15μl反應mix和5μl樣本（抽提后的RNA），
或5μl RNA提取試劑盒中的洗脫緩沖液，作為陰性對照，或5μl PCR級水作為無模板對照，或5μl陽性對照。
（4）扣緊PCR管，然后短暫離心。
（5）將PCR管放置qPCR儀上，蓋好蓋。
步驟3.在qPCR儀上設置反應程序，
示例: 1 cycle 50 °C for 20 min
1 cycle 95 °C for 10 min
45 cycles 95 °C for 15 sec
60 °C for 1 min
(以上程序僅依據廠家經驗，用戶可根據實際情況調整溫度和孵育時間)
步驟4. 啟動程序
八、使用注意事項：
1.使用前應認真閱讀說明書。
2.來自不同批次的試劑不能混合。
3.試劑盒內的試劑應始終作為一個整體溶解分裝。
4.試劑盒應在效期內使用。
5.每次PCR至少應設置一個陽性對照。每次PCR至少應設置一個陰性對照和/或一個無模板對照。如果實驗者自己抽提RNA，則可使用洗脫緩沖液作為陰性對照。對照必須與待測樣品的處理方式相同。您也可能需要其他實驗室提供的對照品，例如含高、中、低不同濃度的RNA樣品。使用對照，對于確認結果的可靠性或用于排除故障非常有意義。
6.建議在無RNA和DNA污染的條件下進行RT-PCR，以避免操作過程中DNA或非特異RNA的交叉污染。（MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧，英文名：PCR Clean?，貨號15-2025，預先清潔實驗環境。）
7.RNA模板濃度，應依據提取RNA的質量、來源、感興趣基因的相對豐度、以及是否為低拷貝基因，來調整優化。
8.該試劑盒建議逆轉錄步驟的溫度為50°C。但這個溫度及持續時間可根據實驗室自己的分析要求進行優化，以增強反應的性能。
九、其他相關試劑
更多詳情可訪問，德國MB官網：www.minervabiolabs.com中國總代理北京締一生物官網：www.njjysf.com咨詢及訂購熱線：400-166-8600，13810524913，010-84118494Q Q：1580434811，1258888686郵箱：servicebj@viansaga.com
(締一生物)
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