PCR擴增過程主要三個步驟

?PCR擴增?（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈式反應）是一種在體外擴增特定DNA片段的技術。其基本過程包括三個主要步驟：變性、退火和延伸，這三個步驟在一個循環中重復多次，從而實現DNA的指數級擴增。

變性

溫度：通常將反應體系加熱至 94-98°C。

目的：高溫使雙鏈 DNA 的氫鍵斷裂，兩條鏈解開成為單鏈，以便引物能夠與模板鏈結合。

時間：一般持續 15-30 秒，以確保所有的雙鏈 DNA 都完全解鏈。

退火

溫度：溫度降低至 50-65°C。

目的：引物與單鏈 DNA 模板的互補序列特異性結合，形成 DNA 模板 - 引物復合物，為后續的 DNA 合成提供起始位點。退火溫度的設定取決于引物的序列和長度等因素，一般根據引物的 Tm 值進行優化選擇1。

時間：持續 15-30 秒，讓引物有足夠的時間與模板 DNA 結合。

延伸

溫度：提升至 72°C 左右。

目的：在熱穩定 DNA 聚合酶（如 Taq 聚合酶）的作用下，以 dNTP 為原料，按照堿基互補配對原則，從引物的 3’端開始，沿模板鏈合成新的 DNA 鏈。

時間：根據目標 DNA 片段的長度而定，通常每 1kb 的 DNA 需要 1 分鐘左右。

這三個階段構成了一個 PCR 循環，一個典型的 PCR 實驗可能包含 25-40 個這樣的循環，以獲得足夠量的目標 DNA。在完成設定的循環次數后，一般還會設置一個最后的延伸步驟，如在 72°C 下延伸 5-10 分鐘，以確保所有 DNA 片段都被完全合成。