德國(guó)Minerva Biolabs支原體qPCR檢測(cè)試劑盒操作步驟

德國(guó)Minerva Biolabs公司，通稱(chēng)德國(guó)MB公司，Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上較為出名的微生物污染控制公司，尤其是支原體和軍團(tuán)菌的技術(shù)和產(chǎn)品，在全球科研行業(yè)上很受歡迎。有很多做細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)都對(duì)德國(guó)MB公司的支原體污染檢測(cè)試劑盒感興趣，今天締一生物小編就跟大家分享一下MB支原體qPCR檢測(cè)試劑盒的操作步驟。

德國(guó)Minerva Biolabs支原體qPCR檢測(cè)試劑盒操作步驟

第1步：樣本處理

a.細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說(shuō)明：

①樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測(cè)定靈敏度。

②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測(cè)靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實(shí)現(xiàn)最高靈敏度。

推薦：德國(guó)MB公司生產(chǎn)的專(zhuān)用支原體DNA提取試劑盒

Venor? Gem Sample Preparation Kit

該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過(guò)廣泛驗(yàn)證。

第2步：試劑制備

a.凍干粉溶解

b. 反應(yīng)體系制備

b1) 樣品為細(xì)胞上清篩查——反應(yīng)體系制備

b2) 樣品為生物藥——反應(yīng)體系制備

第3步：?jiǎn)?dòng)熒光定量PCR儀

第4步：結(jié)果判別

FAM通道：檢測(cè)支原體熒光信號(hào)。HEX通道：檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照熒光信號(hào)。

支原體DNA和內(nèi)控DNA存在信號(hào)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。

支原體DNA越多，FAM通道信號(hào)越高，檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照的HEX通道信號(hào)越低。

定量需基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Ct＜40為陽(yáng)性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。

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