實驗室支原體污染檢測方法大PK,支原體PCR檢測試劑盒C位出道!

實驗室支原體污染檢測方法大PK

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發表時間:2022-12-22 14:49作者:締一生物

對于在實驗室的工作學習的同學們而言,判斷自己養的細胞是否被支原體污染,需要更精準的數據來證明污染。

隨便上網一搜,好家伙這檢測方法還真不少。好幾種挑來挑去都挑花了眼,仿佛「大型選秀現場」今天我們就來評判一下,現有的支原體檢測方法,到底誰才能C位出道。我們將從業務能力、突出優勢、缺點不足四個方面對話每位選手進行評判。

1號 支原體培養法

締一生物:這位選手可以開始自我介紹了。

培養法:我叫支原體培養法,通過專用的培養基對待檢樣品中的支原體進行分離鑒定,簡單來講,就是把細胞培養液或者細胞懸浮液接種到培養基,在一定條件下培養,觀察是否有支原體菌落出現,有點像荷包蛋,但也不是所有的支原體菌落都是荷包蛋樣的,也有圓形的。

締一生物:說說你的優勢是什么?

培養法:我的靈敏度很高,而且是《中國藥典》認同的方法。

締一生物:但是菌落培養應該需要很長時間吧?

培養法:是的,分離培養過程中長出明顯克隆需要7—29天,時間比較長,操作也比較復雜。

締一生物:而且你還有一個明顯的缺點,不是所有的支原體都能人工培養出來的,所以有一些你是檢測不出來的。


2號 支原體DNA染色法

締一生物:請介紹一下你自己。

支原體DNA染色法:我叫支原體DNA染色法,通過把樣品接種到指示細胞中,就比如Vero細胞之類的,經過培養之后,用特異性熒光染料(比如Hoechst染料)對支原體DNA進行染色,順便說一句,我也是藥典推薦的方法。

締一生物:OK,那你有什么特長?

支原體DNA染色法:跟1號選手相比,我普適性更強,適用于一些不易培養的支原體,操作也更簡單。

締一生物:那缺點呢?

支原體DNA染色法:鑒定時間稍稍有些長,大概要4—14天,也有假陽性、假陰性的可能,需要在細胞污染比較嚴重的時候才能檢測出來。


3號 支原體ELISA法

締一生物:3號選手來介紹一下你自己吧。

支原體ELISA法:我可是這幾種方法里最考驗操作者技術的一種。用支原體特異性抗體來檢測相應的支原體。

締一生物:對操作者技術要求高可不見得是什么優勢,實驗室操作人員都需要,用最簡單但可靠性又很高的方法來進行檢測。而且,我覺得你很依賴抗體,不夠廣譜,對于沒有抗體的支原體你就沒有辦法處理了,而且稍不留意就容易出現實驗誤差。

支原體ELISA法:但是我的特異性很高,時間也比較短,3-5小時就可以出結果了。


4號 PCR組合

締一生物:你們倆是必須一起合作,還是可以獨立工作呢?

常規PCR&qPCR:我們倆是一對兄弟,各自的業務能力都很強,無論是誰均可以獨立完成支原體檢測的工作。

締一生物:哦?那分別做一下自我介紹吧,哥哥常規PCR先來吧。

常規PCR我會根據支原體核糖體16s—23s rRNA的特異保守序列設計引物,對待檢樣本DNA進行擴增,通過分析對比擴增產物的大小來做出診斷。

締一生物:那你跟其他幾位比有什么優勢呢?

常規PCR:我的靈敏度高、特異性好;耗時短,2—3小時出結果;符合歐洲藥典;重點是操作簡便。


締一生物:那弟弟再來介紹一下自己吧。

qPCR:我前期的工作跟哥哥一樣,后續我可以將「針對支原體特異性保守序列探針」做熒光標記,使擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件進行DNA擴增反應的實時監控。也就是說,我比哥哥多了一個相對量化的功能(就比如A樣品是B樣品的2倍這樣)。

締一生物:但我覺得你們倆都兩個缺點:不能判斷滅活處理后的樣品是否還有活的支原體,因為支原體DNA一直都在也就是說,沒辦法判斷支原體滅活效果,而且你們鑒別支原體的能力,比較依賴試劑的質量,不知道試劑的效果如何呢?

qPCR:其實我們可以聯合其他選手成團合作,這樣準確率更高;關于質量方面也無需擔心,我們來自以嚴謹著稱的德國,是**生物試劑公司MB開發的專業支原體檢測試劑盒,支原體和軍團菌技術和產品的開發在世界上遙遙領先。

經過一番激烈激烈的角逐,我們對各種檢測方式也有了更清晰的認識:


培養法是金標準,但是周期長,有些支原體還檢測不到;

染色法普適性強,操作簡單,但是對于支原體數量有要求;

ELISA法耗時短,但是對操作人員要求比較高;

PCR的方法基本包含了上面所有的優點,除了不能分辨支原體的死活。屬于這些方法里綜合能力最強,性價比最高的了


綜合評判,我們決定把C位頒給PCR檢測法!恭喜PCR法此次C位出道!

但是市面上支原體PCR檢測試劑盒質量參差不齊,大家在選的時候要注意品牌以及消費者口碑,選擇靠譜的產品。德國Minerva Biolabs公司的試劑盒就是一個不錯的選擇。

MB公司1999年在德國柏林成立,獨立于德國**的Robert-Koch Institute,專業生產微生物污染檢測、預防和清除產品。qPCR檢測試劑盒節省時間、靈敏度高、特異性高,為科研工作者帶來便利。了解更多MB微生物污染控制試劑,歡迎訪問締一生物官網:www.njjysf.com。

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