細胞焦亡既不屬于壞死也不屬于凋亡，而是一種獨立的程序性細胞死亡方式。以下是對細胞焦亡、壞死和凋亡的詳細比較： 一、細胞焦亡 定義：細胞焦亡(Pyroptosis)又稱細胞炎性壞死，是一種程序性細胞死亡方式。它表現為細胞不斷脹大直至細胞膜破裂，導致細胞內容物的釋放，進而激活強烈的炎癥反應。 機制：細胞焦亡是由gasdermin介導的，依賴于炎性半胱天冬酶(主要是caspase-1、4...
RNase是核糖核酸酶（Ribonuclease）的簡稱，是一類能夠水解RNA的蛋白質。以下是對RNase的詳細解釋：一、基本特性作用機制：RNase通過切斷RNA分子中的磷酸二酯鍵，將RNA降解為單核苷酸或寡核苷酸。存在范圍：這類酶廣泛存在于真核生物、原核生物以及部分病毒中，是生物體內重要的核酸代謝酶之一。二、分類根據酶的作用機制和特性，RNase可以分為多種類型，如外切核糖核酸酶和內切核...
耐高溫的DNA聚合酶是Taq酶，具體解釋如下：一、定義與來源Taq酶，也被稱為Taq DNA聚合酶，是從水生棲熱菌Thermus Aquaticus（Taq）中分離出的一種具有熱穩定性的DNA聚合酶。這種細菌最初是在美國黃石公園的一個熱泉中被發現的。二、特性與應用特性：Taq酶能夠耐受90℃以上的高溫而不失活，這是其最顯著的特點。在PCR循環中，包括變性（90°C左右）、退火（50°C左右）...
細胞培養基中支原體污染的危害是多方面的，以下是具體的危害分析：細胞生長受抑制：支原體污染會使細胞生長受到明顯抑制，導致細胞增殖速度減慢，甚至停止。這直接影響了細胞培養的效率和產量。細胞病變：支原體感染會導致細胞發生病變，細胞可能出現變圓、從培養瓶壁脫落等現象。這些病變細胞不僅失去了正常的生理功能，還可能對周圍的健康細胞產生負面影響。影響細胞代謝和功能：支原體污染會影響細胞的代謝途徑和功能，導...
誘導多能干細胞（Induced Pluripotent Stem Cells，簡稱iPSC）是由已分化的體細胞轉化而來。這些體細胞可以是來自成體組織的多種類型細胞，例如皮膚細胞、血細胞等。通過特定的基因重編程技術，將這些體細胞中的基因進行重編程，使其恢復到類似胚胎干細胞的多能性狀態。這一過程通常涉及將幾個關鍵的轉錄因子（如Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc）導入體細胞中，從而激活細胞內...
原代細胞容易污染的原因多種多樣，主要包括以下幾個方面：一、操作不當在原代細胞的分離、培養和傳代過程中，操作人員的不潔凈操作是導致污染的重要原因。例如，操作人員在打開培養瓶、移液等操作過程中，如果沒有在酒精燈火焰附近進行或雙手沒有進行充分消毒，就可能將微生物帶入細胞培養環境。此外，無菌技術不到位或實驗室環境的污染也可能導致原代細胞被外源性污染物污染。二、培養物和試劑污染培養物和試劑中可能存在微...
在PCR（聚合酶鏈式反應）中，檢測樣品所需的微升數并不是一個固定的值，它取決于多種因素，包括PCR反應體系的總體積、樣品的濃度、以及實驗的具體要求等。以下是對這一問題的詳細分析：一、PCR反應體系的總體積PCR反應體系的總體積通常在10~100微升之間，但具體數值可能因實驗設計和儀器要求而有所不同。常見的PCR反應體系總體積包括10微升、20微升、50微升等。二、樣品的濃度樣品的濃度是影響P...
在生物學實驗和細胞培養中，關于10%胎牛血清（FBS）的濃度描述，通常是指體積濃度。這意味著在配制細胞培養基時，胎牛血清占總體積的10%，而剩余的90%則是基礎培養基。
具體配制步驟如下（以配制100mL含有10%胎牛血清的培養基為例）：消毒操作：在無菌工作臺下操作，確保所有用具和試劑都是無菌的，以防止細胞培養的污染。血清解凍：將胎牛血清提前解凍至適宜溫度。基礎培養基準備：量取90mL...
2024年10月，山東大學齊魯醫院婦產科生殖醫學中心；山東大學臨沂市人民醫院生殖醫學科 (Center for Reproductive Medicine, Department of Obstetrics and Gynecology, Qilu Hospital of Shandong University, 107 Wenhua West Road, Ji’nan, Shandong ...
2024年10月，呼和浩特**醫院醫學檢驗科；內蒙古農業大學生命科學學院；內蒙古自治區人民醫院神經內科 (Department of Medical Laboratory, Huhhot First Hospital, Hohhot, Inner Mongolia 010020, China b College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricul...
細胞代謝產物是細胞正常生理活動的必然產物，在細胞培養過程中，某些代謝產物的積累可能會影響培養液的外觀和細胞的狀態，甚至導致白色絮狀物的出現。蛋白質沉淀：細胞在代謝過程中會產生大量的蛋白質，當培養液中的蛋白質濃度過高時，可能會發生沉淀。這種沉淀通常是絮狀或顆粒狀，不溶于培養基。例如，在凍存細胞復蘇后，DMSO和血清混合后在低溫下容易導致蛋白質變性沉淀。磷酸鈣沉淀：血清中含有磷酸鈣，在特定條件下...
如果血清被污染了，處理的方法會因污染的類型和程度而有所不同。以下是一些常見的處理步驟和建議：一、識別污染類型首先，需要確定血清被何種類型的污染物污染。常見的污染物包括細菌、真菌、支原體、病毒以及化學物質等。通過觀察血清的外觀、氣味以及進行微生物培養等實驗，可以初步判斷污染的類型。二、處理不同類型的污染細菌污染：如果污染較輕，可以嘗試更換抗生素的種類，并加大抗生素的用量，以抑制細菌的生長。如果...
在聚合酶鏈式反應（PCR）這一分子生物學領域的核心技術中，退火溫度扮演著至關重要的角色。它不僅是決定PCR反應特異性的關鍵因素，還直接影響擴增效率，進而影響最終的實驗結果。本文旨在深入探討退火溫度對PCR反應的影響，以及如何通過優化退火溫度來提高PCR實驗的準確性和可靠性。一、退火溫度：PCR反應中的“黃金分割點”退火，作為PCR循環中的關鍵步驟，是指引物與模板DNA在特定溫度下特異性結合的...
在分子生物學研究中，聚合酶鏈式反應（PCR）是一種不可或缺的技術，它能夠在體外快速、特異地擴增特定的DNA片段。然而，PCR的成功與否在很大程度上取決于一系列精細的實驗條件，其中退火溫度的設定尤為關鍵。本文將深入探討退火溫度的原理、實驗方法及其在PCR擴增中的重要性，旨在為科研人員提供實用的指導和策略。一、退火溫度：PCR擴增的“溫度計”退火溫度，即PCR循環中引物與模板DNA結合的溫度，是...
聚合酶鏈式反應（PCR）作為分子生物學領域的核心技術，其成功實施離不開一系列酶制劑的精確作用。這些酶制劑在DNA的復制、修復及擴增過程中扮演著重要的角色，它們不僅決定了PCR實驗的效率和準確性，還直接影響了實驗結果的可靠性和可重復性。本文將深入探討PCR實驗中常用的酶制劑，解析它們的功能及其在實驗中的具體應用。一、DNA聚合酶：PCR反應的“發動機”DNA聚合酶是PCR實驗中最核心的酶制劑，...
聚合酶鏈式反應（PCR）是一種高度敏感且強大的分子生物學技術，廣泛應用于科研、醫學診斷及法醫學等領域。然而，盡管其技術成熟且應用廣泛，PCR實驗卻極易受到各種形式的污染，尤其是核酸污染，這種污染往往會導致實驗失敗。本文將深入探討核酸污染如何影響PCR實驗，并闡述其導致實驗失敗的具體機制。核酸污染的定義與來源核酸污染是指在進行核酸檢測時，樣本或檢測試劑受到其他核酸的污染，這些污染物可能來自實驗...
近日，德國維爾茨堡大學生物中心生物技術與生物物理學系的研究人員在Science期刊上發表了一篇具有重要意義的論文，這項工作由歐洲研究委員會、德國聯邦教育和研究部以及德國研究基金會資助。該研究聚焦于治療性單克隆抗體（mAbs）與CD20分子之間的相互作用機制。這項研究不僅為理解mAbs如何激活免疫系統以殺死B細胞提供了關鍵的分子層面見解，還可能對改進現有mAbs藥物的設計和開發產生深遠影響。背...
RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈式反應）和qPCR（實時熒光定量聚合酶鏈式反應）是兩種基于聚合酶鏈反應（PCR）技術的核酸擴增方法，它們在應用、原理和特點上存在顯著區別。以下是兩者的詳細對比：
一、應用范圍RT-PCR：主要用于定性分析，即檢測目標基因的存在與否。常用于檢測RNA的表達水平，例如檢測基因的轉錄水平、mRNA的表達等。也廣泛應用于基因轉錄水平分析、miRNA表達研究以及病毒...
?PCR擴增?（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈式反應）是一種在體外擴增特定DNA片段的技術。其基本過程包括三個主要步驟：變性、退火和延伸，這三個步驟在一個循環中重復多次，從而實現DNA的指數級擴增。 變性溫度：通常將反應體系加熱至 94-98°C。目的：高溫使雙鏈 DNA 的氫鍵斷裂，兩條鏈解開成為單鏈，以便引物能夠與模板鏈結合。時間：一般持續 15-30 秒，...
實時定量聚合酶鏈式反應（Real - time PCR），也稱為實時熒光定量 PCR，是一種在 PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。基因表達定量分析基礎研究方面：在分子生物學基礎研究中，用于研究基因在不同細胞類型、發育階段以及不同環境刺激下的表達變化。例如，在胚胎發育研究中，可以利用 Real - time...
光線作為一種重要的環境因素，對細胞培養過程有著復雜而多樣的影響。在細胞培養實驗中，了解并控制光線條件，對于維持細胞的正常生長、繁殖以及保證實驗結果的準確性和可靠性至關重要。一、光線對培養基成分的影響光線會直接作用于細胞培養基中的某些成分，特別是B族維生素（如B2、B12）和芳香族氨基酸（如色氨酸、酪氨酸）。這些成分在光照條件下會發生光化學轉化和光降解，導致培養基的性狀、性能及儲存有效期發生改...
熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一種在PCR擴增反應體系中加入熒光基團，對擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。以下是熒光定量PCR的原理和步驟的詳細解釋：一、熒光定量PCR原理熒光定量PCR的基本原理是利用DNA聚合酶在PCR過程中合成新DNA鏈的特性，結合一種熒光標記的探針或染料，通過實...
Taq DNA聚合酶的**反應溫度主要與其催化活性有關。以下是對Taq DNA聚合酶**反應溫度的詳細分析：一、最適催化溫度Taq DNA聚合酶在催化DNA合成時，有一個較高的最適溫度范圍，通常為7580℃。在這個溫度范圍內，Taq DNA聚合酶的催化活性最高，延伸速率達到峰值。實驗證明，在最適溫度下，Taq DNA聚合酶的dNTP摻入速度非常快，可以達到35100 nt/(s·酶分子)，最...
細胞凍存與復蘇是一種用于長期儲存細胞的技術，其原理和過程分別如下：細胞凍存的原理細胞凍存是指將細胞保存在超低溫環境中，暫時停止細胞的代謝活動，使細胞進入“冬眠”狀態的一項技術。一般細胞凍存遵循“慢凍”原則，這是因為在降溫過程中，細胞器會脫水，細胞內可溶性物質濃度增加，并形成冰晶。緩慢冷凍的過程可以逐漸使細胞脫水，以防止細胞內形成大冰晶，因為大冰晶可能導致細胞膜和細胞器的損傷和破裂。同時，常使...
PCR技術（聚合酶鏈式反應）需要兩種引物的原因主要基于其擴增DNA片段的機制和原理。以下是詳細解釋：一、PCR技術的基本原理PCR技術是一種在體外酶促擴增特定DNA片段的技術，類似于DNA的天然復制過程。它以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5′端和3′端互補的寡核苷酸為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸至完成新的DNA合成。其主要過程由變性、退火和延伸...
