德國Minerva-Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟

德國Minerva-Biolabs公司支原體qPCR檢測試劑盒，也是熒光定量檢測法，今天締一生物小編介紹的是支原體qPCR檢測試劑盒一步法，何為“一步法”呢？簡單來說就是直接將內控添加到預混液中，使用起來更加方便、節省時間。     

  德國Minerva-Biolabs支原體qPCR檢測試劑盒一步法，英文：VenorGeM? OneStep，下面小編詳細介紹一下VenorGeM? OneStep支原體qPCR檢測試劑盒一步法。

支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟與支原體qPCR檢測試劑盒經典法大致相同：樣品處理?試劑制備?體系建立?啟動PCR反應?結果判定。     

樣品處理：取100μl左右的細胞上清液95℃孵育后離心，取適量用于后續qPCR。細胞培養樣品易含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原體DNA。因而推薦進行樣品穩定化處理。

試劑制備：將緩沖液、預混液、陽性對照等試劑按照說明書要求，該離心的離心、該混合的混合，處理好后扣緊蓋子備用。

PCR體系建立：在PCR管中，根據需要，加入樣品、陽性對照、新鮮培養基（陰性對照），并且設置好重復孔，蓋好蓋子，震蕩混勻。

啟動PCR反應：按照所需參數，設置好PCR儀，啟動程序（具體參數詳見產品使用說明或是締一生物官方網站，點擊下方閱讀原文即可）。

FAM通道：檢測支原體熒光信號。

HEX通道：檢測內控對照熒光信號    支原體DNA和內控DNA，存在信號之間的競爭性抑制支原體DNA越多，FAM通道信號越高檢測內控對照的HEX信號通道信號越低。定量需要基于Ct值和DNA標準曲線   Ct＜40為陽性結果。CCt≥40為陰性結果。               

支原體qPCR檢測試劑盒一步法操作步驟與支原體qPCR檢測試劑盒經典法在以下幾個方面都是相同的：

①都具有高特異性：一次即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。       

②都具有高靈敏度：最高檢測限可達到10CFU/ml。         

③都具有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。       

④都有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。不同之處在于，一步法試劑盒省去了配置內控對照的環節，為實驗人員節省了寶貴時間，但相應的，價格也會比經典法試劑盒高出一部分。