細胞培養過程中細胞被支原體污染怎么辦？

支原體是目前已知一類能在無生命培養基上生長繁殖的最小的原核細胞微生物，分為兩個屬：一為支原體屬（Mycoplasma），有幾十個種；另一為脲原體屬（Ureaplasma），僅有一種。革蘭染色為陰性，但不易著色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。

支原體在自然界分布廣泛，無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態易變，極易通過除菌過濾器。大部分支原體繁殖速度比細菌慢，適宜生長溫度為35℃，適合于偏堿條件下生存（pH7.6—8.0），對酸耐受性差，對75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。對熱比較敏感在細胞培養過程中如果在顯微鏡下發現破碎的細胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養的時候，即應懷疑支原體污染。細胞培養過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。

支原體污染的嚴重性

（1）細胞外形可以沒有明顯的變化，支原體可以與細胞共存，污染后細胞液不會死亡，培養基一般不發生渾濁；

（2）使用被支原體污染的細胞做實驗會嚴重影響實驗的結果，因為支原體會抑制細胞生長；導致染色體畸變；細胞膜抗原性改變；細胞復蘇后存活率降低等。

（3）影響細胞的代謝和功能：培液中的精氨酸被支原體大量消耗，引起細胞蛋白質、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙；支原體活動使培液成分發生改變（如發酵型支原體降解糖類產生酸性物質），影響細胞代謝。

（4）培養過程中細胞破碎較多，培養基pH變化明顯，需要頻繁更換新鮮培養基；

（5）細胞被支原體污染后會形成共生體系導致污染不斷擴大。

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（3）活性穩定。在細胞培養期間，Zell Shield始終保持穩定的活性。     

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