細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)支原體污染怎么處理

支原體在自然界廣泛存在，尤其可以寄生于人、哺乳動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)等物種。人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，支原體對(duì)細(xì)胞的污染風(fēng)險(xiǎn)不容忽視，這不僅因?yàn)槌Ｒ?guī)的抗生素對(duì)支原體無(wú)效，而且因?yàn)槲廴驹缙谝矝](méi)有顯著表現(xiàn)。一旦發(fā)生污染，支原體會(huì)影響細(xì)胞基因表達(dá)和營(yíng)養(yǎng)代謝改變，嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果（包括細(xì)胞轉(zhuǎn)染和病毒包被）。這時(shí)應(yīng)怎么辦？有沒(méi)有一款細(xì)胞祛除支原體試劑能解決呢？

一般來(lái)說(shuō)，出現(xiàn)污染的細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行丟棄，因?yàn)樗鼈兛赡艹蔀閷?shí)驗(yàn)室內(nèi)支原體污染的源頭，造成污染的擴(kuò)散。但對(duì)于費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞（如已轉(zhuǎn)染，或經(jīng)過(guò)體外刺激），有些人不愿意丟棄，這是可考慮使用支原體祛除劑。

目前，市場(chǎng)上有不少品牌的支原體祛除劑，但需要進(jìn)行區(qū)分一下。因?yàn)樵聿灰粯?。有的是符合抗生素成分，僅僅是抑制支原體的增殖。有的則對(duì)支原體確實(shí)有殺滅作用，這種祛除劑見(jiàn)效快。但需要注意，在使用時(shí)應(yīng)將細(xì)胞團(tuán)打散，使其變?yōu)閱蝹€(gè)細(xì)胞懸浮狀態(tài)，因?yàn)橹гw可能藏在細(xì)胞間隙中，而祛除劑需要和支原體接觸，才能發(fā)揮支原體的殺除作用。同時(shí)要注意細(xì)胞濃度要進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般祛除劑對(duì)細(xì)胞密度都有一定要求，細(xì)胞數(shù)量不能太多。

祛除支原體試劑Zell Shield?用法

（1）在每次使用Zell Shield?之前，細(xì)胞傳代時(shí)，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細(xì)胞，再使用加了Zell Shield?的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞，能達(dá)到更好的祛除支原體的效果（“懸浮沖洗法”的詳細(xì)步驟，見(jiàn)下文）。

（2）Zell Shield?常規(guī)為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配置。避免反復(fù)凍融。

（3）Zell Shield?按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield?，50mL/瓶的Zell Shield?可供5L培養(yǎng)基使用。

傳至3-4代時(shí)，原先細(xì)胞中的支原體則基本上沒(méi)有了。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，由于支原體污染沒(méi)有顯著癥狀，因此需要定期監(jiān)測(cè)，可采用PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)，要注意周?chē)h(huán)境的清潔，避免支原體污染，可采用一些對(duì)支原體有效的噴霧劑和濕巾進(jìn)行清潔。細(xì)胞培養(yǎng)箱也可使用專(zhuān)門(mén)的支原體祛除劑，否則溫度合適后，培養(yǎng)箱的用水中可容易滋生微生物和支原體。

防患于未然。一旦出現(xiàn)支原體污染也不要慌張，不重要的細(xì)胞可以扔掉。重要的細(xì)胞可以如上面所述采用支原體祛除劑進(jìn)行清除。