支原體檢測常見問題答疑（一）——MB支原體檢測試劑盒

在細(xì)胞培養(yǎng)中檢測是否有支原體污染的時(shí)候，一些常見的支原體污染檢測問題，本期締一生物小編結(jié)合德國MB公司支原體檢測試劑盒來跟大家分享支原體檢測問題答疑。

問：在用qEP做支原體檢測的時(shí)候，加入內(nèi)控對(duì)照品，在儀器設(shè)置上是需要選擇兩個(gè)通道嗎？

答：是需要2個(gè)通道，一個(gè)FAM, 一個(gè)HEX，HEX是對(duì)應(yīng)內(nèi)控的通道。

問：我想問一下，7500儀器里面沒有HEX這個(gè)通道選項(xiàng)，可以用哪個(gè)通道代替呢？

答：7500這款是沒有HEX熒光標(biāo)識(shí)，不過問過廠家，說7500有VIC，可以用VIC通道。

問：qPCR結(jié)果判定中，FAM positive，HEX irrelevant中這個(gè)不相關(guān)是具體指什么？

答：這個(gè)不相關(guān)是指如果FAM是陽性，那么由于擴(kuò)增時(shí)存在競爭性抑制，所以內(nèi)控是否有擴(kuò)增，其無關(guān)緊要。

問：在用樣品制備試劑盒時(shí)，進(jìn)行支原體DNA提取時(shí)，加入內(nèi)控對(duì)照品，實(shí)際上是監(jiān)控在提取操作總是否能夠binding支原體DNA，而無法監(jiān)測這步操作的回收率的，是嗎？

答：“實(shí)際上是監(jiān)控在提取操作總是否能夠binding支原體DNA”，可以這么理解，或者說是在監(jiān)測整個(gè)提取過程。我們又問了一下廠家，內(nèi)控和樣品的提取效率是一樣的，這樣可以反映樣品的真實(shí)情況，因?yàn)橹灰獌?nèi)控提取后能測出來，那就表明提取是沒有問題的。極少量的支原體如10CFU的，通過提取，也是可以檢測到的，表明靈敏度是沒有問題的。樣本Ct值和10CFU的Ct值比較，是可以進(jìn)行相對(duì)定量的。

問：你們好，我問一下你們這個(gè)Venor Gem qEP試劑盒能做放行檢測嗎?

答：放行應(yīng)相當(dāng)于國外說的release testing, 這個(gè)qEP試劑盒是符合國外藥典規(guī)定的性能，能做放行檢測的。同時(shí)需注意要做支原體DNA抽提才行，抽提是用另外一個(gè)盒子，見廠家的venor gem sample preparation kit。

問：這個(gè)如果是用來檢測細(xì)胞上清，是不是就不用提取DNA了呢？

答：只要是跟藥典有關(guān)，跟臨床治療或制藥檢驗(yàn)有關(guān)，就需要提取DNA。如果僅僅是科研用培養(yǎng)細(xì)胞，篩查支原體，則可以不提。

問：詢問qPCR儀器的設(shè)置

答：具體可見MB廠家文件Venor^?GeM qEP: Cyclers Programming，可從網(wǎng)站上下載。

由于篇幅有限，以上就是支原體檢測問題答疑的一部分，我們下篇文章繼續(xù)分享。如果您還想了解更多的信息，可咨詢德國MB中國區(qū)總代理北京締一生物科技有限公司官網(wǎng)：www.njjysf.com。