淺談qPCR檢測(cè)中「內(nèi)參」的意義

一內(nèi)參的意義

qPCR本質(zhì)就是測(cè)定樣品中某個(gè)模板的起始量ct值。但在實(shí)際操作過(guò)程中，由于之前DNA提等步驟，各個(gè)步驟存在不同的效率，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響，每個(gè)樣本的Ct值并無(wú)法真實(shí)反映每個(gè)樣品中初始模版的絕對(duì)量，這就使得我們無(wú)法對(duì)不同處理的樣本進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。因此，我們需要一個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每一個(gè)樣本進(jìn)行校正，排除其他無(wú)關(guān)因素帶來(lái)的的影響。

二什么是內(nèi)參

內(nèi)控(內(nèi)參，Internal Control)，也就是內(nèi)部參照測(cè)量，也叫內(nèi)部控制。使用內(nèi)參的目的是便于在分析過(guò)程中，將不同樣品的起始量做均一化處理。內(nèi)參通常選擇在不同組織中有穩(wěn)定表達(dá)量或不受實(shí)驗(yàn)處理影響的基因，在每個(gè)樣品中的表達(dá)量不發(fā)生變化，比如管家基因（house-keeping gene）。以小鼠為例，常用的內(nèi)參有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等，有時(shí)也可以用基因組DNA做內(nèi)參。

三MB中的內(nèi)參

MB Venor?Gem qEP，用經(jīng)典的qPCR方法檢測(cè)樣品中是否含有支原體，其中也會(huì)用到內(nèi)參（內(nèi)控），可以在對(duì)支原體其作用也是對(duì)樣品做均一化處理，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定。