Real-time PCR和普通PCR的區別

Real-time PCR（實時熒光定量PCR）和普通PCR（常規PCR）是兩種不同的分子生物學技術，它們在實驗操作、數據分析以及應用領域等方面存在顯著差異。以下是對這兩種技術的詳細比較：一、實驗操作上的區別

Real-time PCR：

在PCR反應過程中實時監測熒光信號的變化。

通過特定的熒光染料或探針與PCR產物結合，實時檢測熒光信號的增強，從而反映PCR產物的擴增情況。

普通PCR：

在PCR反應結束后，通過瓊脂糖凝膠電泳等方法檢測PCR產物的累積量。

擴增后的產物通過電泳分離，形成可見的DNA條帶，根據條帶的亮度和位置判斷PCR產物的量和片段長度。

二、數據分析上的區別

Real-time PCR：

通過擴增曲線、標準曲線、Cp值（通常稱為Ct值，即熒光信號達到閾值時的循環數）等數據進行定量分析。

擴增曲線反映了PCR反應過程中熒光信號的變化，標準曲線則基于一系列已知濃度的標準品繪制而成，用于計算未知樣品中目的基因的濃度。

普通PCR：

通常通過擴增條帶的亮度與已知濃度的條帶進行比較，從而獲得“半定量”的結果。

由于無法實時監測熒光信號，因此無法實現對DNA或RNA分子數量的實時定量分析。

三、應用領域上的區別

Real-time PCR：

基因表達定量：通過實時熒光定量PCR技術，可以檢測特定基因在不同樣品中的表達水平。

病原菌檢測：實時熒光定量PCR技術可以用于檢測病原菌的基因序列，從而實現對病原菌的快速檢測。

SNP基因分型：實時熒光定量PCR技術可以用于檢測SNP（單核苷酸多態性）基因序列，從而實現對SNP基因型的分型。

拷貝數變異：實時熒光定量PCR技術可以用于檢測基因組中的拷貝數變異，從而了解基因的拷貝數變化。

普通PCR：

擴增目的基因序列：普通PCR技術可以用于擴增特定的基因序列，為后續的測序、克隆等實驗提供足夠的長度。

基因分型：通過擴增特定基因序列，并結合電泳等方法，可以實現對基因型的分型。

四、其他方面的區別

靈敏度與特異性：

Real-time PCR具有更高的靈敏度和特異性，能夠實現對微量核酸分子的檢測。

普通PCR的靈敏度和特異性相對較低，但具有更高的可靠性。

反應要求：

Real-time PCR適用于擴增片段長度在100~300bp的目的片段。

普通PCR更適用于300bp以上的目的片段。

檢測流程：

Real-time PCR儀除了擴增外，還能在擴增的同時檢測DNA發出的熒光信號，操作相對簡單且快速。

普通PCR儀只能進行擴增，擴增完成后還需要通過電泳等方法進行檢測，操作相對繁瑣。

綜上所述，Real-time PCR和普通PCR在多個方面存在顯著差異。根據實驗需求和目的，選擇合適的PCR技術對于獲得準確可靠的實驗結果具有重要意義。