細胞培養(yǎng)中如何使用南美胎牛血清

在細胞培養(yǎng)中使用南美胎牛血清時，需要遵循一系列正確的操作步驟和注意事項，以確保細胞培養(yǎng)的成功率和細胞的健康狀態(tài)。以下是在細胞培養(yǎng)中使用南美胎牛血清的詳細步驟和注意事項：

一、儲存與解凍

儲存條件：南美胎牛血清應儲存在-20℃的冰箱中，以保持其生物活性。

避免反復凍融：如一次用不完，應進行分裝，以避免反復凍融導致因子活性降低。

解凍方法：使用前，將血清置于2~8℃冰箱過夜溶解，或置于室溫下緩慢解凍，不建議直接放到37℃水浴中快速解凍（升溫過快會導致血清中蛋白質(zhì)大量沉淀，影響血清質(zhì)量）。

二、配制與使用

配制比例：南美胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養(yǎng)基中，混合后配成完全培養(yǎng)基。最常用比例為10%，過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。具體**濃度需要根據(jù)實驗來確定。

現(xiàn)用現(xiàn)配：血清和培養(yǎng)基應盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”，配好的培養(yǎng)液應在一周內(nèi)用完，以保持其新鮮度和有效性。

避免高溫靜置：血清避免在4℃或更高溫度靜置過久，否則會破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。

沉淀處理：血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白，升溫至37℃時會溶解（不建議加熱血清）。若沉淀量較多，可在400×g離心3分鐘，取上清使用。

三、細胞培養(yǎng)操作

準備培養(yǎng)皿：將培養(yǎng)皿放入無菌工作臺中，準備好所需的培養(yǎng)液。

加入培養(yǎng)液：向培養(yǎng)皿中加入適量的培養(yǎng)液，注意避免產(chǎn)生氣泡。

加入血清：按照配制比例加入南美胎牛血清，注意不要加入過多以免影響細胞的生長。

加入細胞懸液：將細胞懸液加入培養(yǎng)皿中，輕輕晃動培養(yǎng)皿使細胞均勻分布。

培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，根據(jù)細胞類型和實驗需求設置適當?shù)呐囵B(yǎng)條件。

四、注意事項

血清質(zhì)量驗證：在使用南美胎牛血清之前，應提前驗證其對所培養(yǎng)的細胞生長的促進作用。可以使用自己經(jīng)常培養(yǎng)的細胞進行驗證。

品牌與批次更換：在更換使用不同品牌或批次的血清之前，也需進行驗證。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細胞完全適應后進行更換。

無菌操作：在整個細胞培養(yǎng)過程中，應嚴格遵守無菌操作規(guī)程，避免污染。

總之，在細胞培養(yǎng)中使用南美胎牛血清時，需要遵循正確的操作步驟和注意事項，以確保細胞培養(yǎng)的成功率和細胞的健康狀態(tài)。