支原體檢測試劑盒qpcr法引物序列

關于支原體檢測試劑盒qPCR法中的引物序列，由于不同品牌、不同型號的試劑盒可能采用不同的引物設計，今天介紹的是德國MB生產的支原體檢測試劑盒qPCR法的詳細介紹，包括引物序列、操作步驟等。

引物在支原體qPCR檢測中扮演著至關重要的角色。它們決定了檢測的特異性、靈敏度和準確性。良好的引物設計可以確保只擴增目標支原體的DNA序列，從而避免非特異性擴增和假陽性結果的出現。

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別， 分『經典法』和『一步法』兩種。   

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品，具有以下獨特的優點：

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經典法最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒一步法最低檢測限≥50個基因組/反應。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品，便于方法學驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

支原體qPCR檢測試劑盒特點

1.內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3.高靈敏度，最低檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

支原體qPCR檢測試劑盒操作步驟

第1步：樣本處理

a.細胞培養上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

    ②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實現最高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產的專用支原體DNA提取試劑盒

Venor? Gem Sample Preparation Kit

該DNA抽提試劑盒已經過廣泛驗證。

第2步：試劑制備

a.凍干粉溶解

b. 反應體系制備

b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備

b2) 樣品為生物藥——反應體系制備

第3步：啟動熒光定量PCR儀

第4步：結果判別

FAM通道：檢測支原體熒光信號。HEX通道：檢測內控對照熒光信號。

支原體DNA和內控DNA存在信號的競爭性抑制。

支原體DNA越多，FAM通道信號越高，檢測內控對照的HEX通道信號越低。

定量需基于Ct值和DNA標準曲線。

Ct＜40為陽性結果。Ct≥40為陰性結果。

示意圖：

儲存條件

2~8℃保存至少12個月。復溶后-18℃以下保存。