實時熒光定量PCR儀的原理是什么

實時熒光定量PCR儀的原理主要基于聚合酶鏈式反應（PCR）和熒光信號的實時監測。PCR是一種體外擴增特定DNA片段的技術，通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸的循環過程，使得目的基因片段得以迅速擴增。

在實時熒光定量PCR中，特定的熒光基團被加入到PCR反應體系中，這些熒光基團可以是熒光染料或是與特定序列結合的熒光探針。隨著PCR循環的進行，熒光基團與目標DNA的結合量也隨之增加，從而發出熒光信號。實時熒光定量PCR儀內部的光源和光學系統能夠實時監測這些熒光信號，并將信號強度轉化為可以讀取和記錄的數據。

在PCR反應的早期階段，熒光信號主要來自于背景熒光和非特異性擴增，因此在這個階段，熒光信號的變化并不明顯。然而，當PCR反應進入指數增長期時，目的基因片段的擴增量呈指數級增長，熒光信號也隨之急劇上升。實時熒光定量PCR儀能夠實時監測這一變化，并通過軟件分析，繪制出熒光信號強度與PCR循環數之間的關系曲線。

通過對比已知模板濃度的標準品所繪制的標準曲線，可以準確地計算出待測樣本中目的基因的初始拷貝數。這種定量方法具有高度的靈敏度和準確性，能夠實現對基因表達的精確測量和比較分析。

總之，實時熒光定量PCR儀的原理是通過實時監測PCR反應過程中的熒光信號變化，結合標準曲線分析，實現對目標基因的準確定量檢測。