細(xì)胞培養(yǎng)中如何清除支原體污染

在細(xì)胞培養(yǎng)中，清除支原體污染是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。以下是一些常用的清除支原體污染的方法：

使用支原體祛除劑Zell Shield?：它是復(fù)合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細(xì)菌和真菌。適合細(xì)胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)（如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞）的情況。使用時(shí)需要采用懸浮沖洗法，并連續(xù)培養(yǎng)三代。

清洗純化法：這種方法包括細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化、優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選、細(xì)胞清洗以及反復(fù)離心洗滌。其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差來清除支原體。通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液，可以將潛在的支原體數(shù)量降低至極限。如果結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，效果會(huì)更好。

動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法：將被支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物的皮下或腹腔中，利用動(dòng)物的免疫系統(tǒng)來消滅支原體。一定時(shí)間后，從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

巨噬細(xì)胞吞噬法：從動(dòng)物腹腔中取得巨噬細(xì)胞，經(jīng)過純化后與被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，可以定期使用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證支原體是否被消除干凈。

抗生素處理：支原體對(duì)多粘菌素、利福平、磺胺藥物等普遍耐藥，但對(duì)四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素有抑制活性。因此，可以選擇這些抗生素來處理被支原體污染的細(xì)胞。

需要注意的是，不同的細(xì)胞類型和支原體污染程度可能需要采用不同的清除方法。此外，處理過程中應(yīng)確保操作規(guī)范，避免交叉污染。同時(shí)，為了預(yù)防支原體污染的發(fā)生，應(yīng)定期檢查細(xì)胞培養(yǎng)物，確保培養(yǎng)環(huán)境的清潔和無菌。

最后，雖然上述方法可以有效地清除支原體污染，但也可能對(duì)細(xì)胞造成一定的不良影響。因此，在清除支原體污染的同時(shí)，也應(yīng)關(guān)注細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝狀態(tài)，確保細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和繁殖。