Ausbian透析胎牛血清助力細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，血清作為細(xì)胞重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，一般的血清可以滿足一般的細(xì)胞培養(yǎng)需求，但是特殊的細(xì)胞就需要一些特殊工藝血清，今天介紹的就是透析血清的其中一個(gè)應(yīng)用方向。Ausbian透析胎牛血清是采用Ausbian特級(jí)胎牛血清，透析過(guò)濾去除10000D以下小分子（如次黃嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（例如同位素標(biāo)記特定小分子，并加入到培養(yǎng)體系中，以研究細(xì)胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。

細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)（簡(jiǎn)稱SILAC）

這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture （SILAC）。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)，一般培養(yǎng)5-6代，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析，即可比較經(jīng)過(guò)不同處理的細(xì)胞，其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸（常采用賴氨酸或精氨酸）。

工程細(xì)胞株的篩選

以常見(jiàn)的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例，該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR），必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆。通過(guò)甲氨蝶呤（MTX）進(jìn)一步篩選，可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等，也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分，參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。

研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對(duì)某種類型細(xì)胞增殖、分化的影響。這時(shí)也需要用透析胎牛血清，以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。

胎牛血清解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。

若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。

為保證更好的細(xì)胞培養(yǎng)效果，血清和培養(yǎng)基的配制，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。

血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過(guò)久，否則會(huì)破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。