細(xì)胞培養(yǎng)使用支原體抑制劑（清除劑）的方法步驟

細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)領(lǐng)域重要的研究工具。支原體污染，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中常見的微生物污染之一。支原體污染，可直接影響細(xì)胞狀態(tài)，造勢(shì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度降低、可重復(fù)性差等問題。

因此，在日常實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)注重實(shí)驗(yàn)室的清潔工作。普通細(xì)胞一旦發(fā)生支原體污染，建議直接丟棄并對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行消殺。如果是非常珍貴的細(xì)胞，不能隨意丟棄，則需要使用支原體抑制劑/清除劑。

德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的支原體清除試劑系列：Zell Shield、Mynox、Mynox Gold，可高效清除支原體污染。

對(duì)于費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞（如已轉(zhuǎn)染，或經(jīng)過體外刺激），如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染，但此細(xì)胞又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield 細(xì)胞支原體去除劑。

（1）在每次使用Zell Shield?之前，細(xì)胞傳代時(shí)，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細(xì)胞，再使用加了Zell Shield?的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞，能達(dá)到更好的祛除支原體的效果。

（2）Zell Shield?常規(guī)為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配制。避免反復(fù)凍融。

（3）Zell Shield?按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield?，50mL/瓶的Zell Shield?可供5L培養(yǎng)基使用。

若是無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox? ，處理3小時(shí)，直接殺除。

（1）將200μLMynox治療液于2.8ml培養(yǎng)液（FBS濃度未5%）混合，加入10^4-10^5個(gè)細(xì)胞。孵育2-3小時(shí)。

（2）終止治療，為細(xì)胞換液。

（3）使用原有正常培養(yǎng)液，傳代3-4次（FBS恢復(fù)至原有濃度）。

（4）取樣，PCR檢測(cè)，鑒定支原體是否清除徹底。

非常珍貴的細(xì)胞或不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄，例如：珍稀的細(xì)胞種子。可采用支原體徹底清除法。若是可以培養(yǎng)超過一個(gè)月的細(xì)胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox? Gold珍貴細(xì)胞株 支原體清除劑，直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理。

（1）將500μL初次治療液與含5%FBS的4.5ml培養(yǎng)液，于離心管中混合均勻。

（2）將配制好的治療液培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

（3）加入10^4-10^5個(gè)細(xì)胞。

（4）培養(yǎng)細(xì)胞至80%-90%匯合度。

（5）細(xì)胞傳代，將需要傳代的細(xì)胞、鞏固治療液、9.5ml原有培養(yǎng)基混合均勻后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿中。

（6）重復(fù)（4）（5）2次后，再次傳代，不添加Mynox Gold。

（7）取樣，PCR檢測(cè)，鑒定支原體是否清除徹底。

北京締一生物科技有限公司國內(nèi)總代Ausbian品牌,德國Minerva-Biolabs微生物污染控制系列。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)使用的Ausbian澳洲進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,新生牛血清，干細(xì)胞培養(yǎng)基,馬血清，德國MB支原體檢測(cè)/祛除試劑盒,DNA污染祛除試劑,支原體PCR/qPCR定量試盒等產(chǎn)品。歡迎訪問締一生物官網(wǎng)：www.njjysf.com。聯(lián)系電話:4006661688。