貼壁細胞傳代培養之胰酶消化法

傳代細胞，可根據不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養基后再吹打分散進行傳代。今天要跟大家分享的是貼壁細胞傳代如何使用胰酶。

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% ，消化液濃度過高時，易造成培養基中細胞碎片增多，黑渣子增多，常規細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化，對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化，細胞密度過高超過80%時，采用分步消化法。胰酶儲存在-20°C，解凍在4°C進行，**次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20°C，避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會。

需要注意的是：

1.傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次**只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材。

2.每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。

3.如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可添加zellshield細胞支原體祛除劑，zellshield為無菌溶液，可直接加入培養基使用。

細胞祛除支原體試劑Zell Shield使用方法：

（1）在每次使用Zell Shield之前，細胞傳代時，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細胞，再使用加了Zell Shield的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

（2）Zell Shield常規為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時按需融化配制。避免反復凍融。

（3）Zell Shield按1:100濃度可直接加入培養基。例如：500ml培養基中添加5ml Zell Shield，50mL/瓶的Zell Shield可供5L培養基使用。