細(xì)胞培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，如何解決細(xì)胞支原體污染?

細(xì)胞培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是細(xì)胞污染了嗎?

出現(xiàn)這種情況，先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒(méi)有變渾濁: 在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過(guò)度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。21黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?

如果判定黑點(diǎn)是污染，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行:

如果是懸浮細(xì)胞: 收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶:如果是貼壁細(xì)胞:將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來(lái)，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。

如果發(fā)現(xiàn)是支原體污染細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體特效的抑制劑，通過(guò)對(duì)細(xì)胞的前期處理，中期加藥，逐步通過(guò)4代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染徹底清除，確保試驗(yàn)順利推進(jìn)，結(jié)果準(zhǔn)確。

Zell Shield?支原體祛除劑是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield?使用方法簡(jiǎn)單，直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。

Zell Shield?原理是通過(guò)抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬?gòu)?fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。