原代細(xì)胞培養(yǎng)技巧，胎牛血清的選擇很重要

細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究最常用的手段之一，可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進(jìn)行培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)。嚴(yán)格地說(shuō)即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到**次傳代階段，但實(shí)際上，通常把**代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。一般持續(xù)1-4周。此期細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。

原代細(xì)胞可以懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。一些細(xì)胞自然地懸浮在懸浮液中，而不附著在表面上（例如，來(lái)源于外周血的細(xì)胞）。也有一些細(xì)胞系經(jīng)過修飾可以在懸浮培養(yǎng)中存活，它們的生長(zhǎng)密度高于粘附條件所允許的密度。對(duì)于依賴貼壁的原代細(xì)胞，貼壁細(xì)胞（例如實(shí)體組織）需要一個(gè)表面才能在體外正常生長(zhǎng)。

這些細(xì)胞大多在沒有涂層的扁平塑料容器中培養(yǎng)，但有時(shí)在微載體上培養(yǎng)，可以用細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（如膠原蛋白和層粘連蛋白）包被，以增加粘附特性并提供生長(zhǎng)和分化所需的其他信號(hào)。細(xì)胞培養(yǎng)基由補(bǔ)充了適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)，并維持在適當(dāng)?shù)臏囟群突旌蠚怏w中（對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，通常為37°C，5％CO2）。培養(yǎng)條件根據(jù)細(xì)胞類型而廣泛變化，生長(zhǎng)培養(yǎng)基的pH、葡萄糖濃度、生長(zhǎng)因子和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的存在可能會(huì)有所不同，具體取決于細(xì)胞類型。

在建立原代培養(yǎng)過程中，必須在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入抗生素以抑制從宿主組織引入的污染?？股乜赡馨☉c大霉素，青霉素，鏈霉素和兩性霉素B的混合物。但是，不建議長(zhǎng)期使用抗生素，因?yàn)槟承┰噭ɡ鐑尚悦顾?/span>B）從長(zhǎng)期來(lái)看可能對(duì)細(xì)胞有毒。

分離后保留原代細(xì)胞的活力非常重要，因?yàn)樗鼈冎械拇蠖鄶?shù)會(huì)經(jīng)歷衰老過程，并在一定數(shù)量的種群倍增后停止分裂。為了使細(xì)胞長(zhǎng)期存活，必須具備出色的細(xì)胞培養(yǎng)操作技能以及適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件（即生長(zhǎng)培養(yǎng)基、溫度、氣體混合物、pH、生長(zhǎng)因子濃度、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和葡萄糖等）。用于補(bǔ)充培養(yǎng)基的生長(zhǎng)因子通常來(lái)自動(dòng)物血液（血液來(lái)源的成分具有污染的可能性），建議盡可能減少或消除這些成分的使用，操作時(shí)也需要使用無(wú)菌技術(shù)。

在生物細(xì)胞學(xué)研究中，有時(shí)需要體外培養(yǎng)和分析癌細(xì)胞。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清。

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