常規(guī)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)大匯總（二）

       今天來(lái)到常規(guī)實(shí)驗(yàn)大匯總的第二期，一起來(lái)學(xué)習(xí)細(xì)胞膜片鉗技術(shù)、細(xì)胞遷移和侵襲技術(shù)。

　　細(xì)胞膜片鉗技術(shù)：

　　膜片鉗技術(shù)（patch clamp techniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對(duì)生物膜上離子通道的電活動(dòng)進(jìn)行記錄的微電極技術(shù)。

　　檢測(cè)原理：

　　用一個(gè)尖端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細(xì)胞膜表面，通過(guò)負(fù)壓吸引使電極尖端與細(xì)胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時(shí)電極尖端下的細(xì)胞膜小區(qū)域（膜片, patch）與其周?chē)陔妼W(xué)上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制, Clamp）電位，對(duì)此膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)及記錄。

　　用途：

　　細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的最重要的技術(shù)。可用于研究與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道、離子通道生理與病理作用機(jī)制。另外，還利用膜片鉗對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究、對(duì)藥物作用機(jī)制的研究、創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選研究、甚至是能用在神經(jīng)科學(xué)的相關(guān)研究中。

　　由于其應(yīng)用廣泛，因此被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

　　特點(diǎn)：

　　實(shí)用、快速、靈敏、準(zhǔn)確及重復(fù)性好，并且還在不斷地改良、優(yōu)化。

　　細(xì)胞遷移和侵襲

　　Transwell：是一種用來(lái)研究細(xì)胞侵襲的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

　　檢測(cè)原理：

　　簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是用一層膜將高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基與低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基分隔開(kāi)。然后將細(xì)胞放在低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基中，細(xì)胞為了生存，為了獲取更多的營(yíng)養(yǎng)，會(huì)向高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基里面移動(dòng)。但是由于膜的存在，因此必須要進(jìn)行穿膜。

　　在膜上涂上一層基質(zhì)膠，用來(lái)模仿細(xì)胞外基質(zhì)。細(xì)胞想要通過(guò)膜，就需要先把基質(zhì)消化了才能進(jìn)入高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中。最終只需要檢測(cè)高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基中的細(xì)胞量就推算出細(xì)胞的侵襲能力。

　　用途：

　　由于商品化Transwell試劑盒的出現(xiàn)，使得濾膜多樣化，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過(guò)不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。

　　特點(diǎn)：

　　高效、迅速，普適度高，可應(yīng)用于多種實(shí)驗(yàn)。

　　劃痕實(shí)驗(yàn)：也叫創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)，是一種簡(jiǎn)單快捷的測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法。

　　檢測(cè)原理：

　　在體外培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)皿中的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它無(wú)菌的硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，用以去除中央部分的細(xì)胞，然后按照實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間（36h、72h等），繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū)，進(jìn)而判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力。

　　實(shí)驗(yàn)通常還需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組往往是加了某種處理因素、藥物或外源性基因等，通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，來(lái)判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

　　用途：

　　可以用來(lái)確定貼壁細(xì)胞的遷移速率。

　　特點(diǎn)：

　　簡(jiǎn)捷、成本低、實(shí)驗(yàn)結(jié)果直觀。但測(cè)量適用的細(xì)胞范圍較小，一般只適用于上皮細(xì)胞，纖維樣細(xì)胞。

　　好物推薦

　　血清在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的重要性不言而喻：

　　提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

　　提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

　　有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

　　是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

　　起酸堿度緩沖液作用。

　　提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

　　參與細(xì)胞凍存。

　　一款優(yōu)質(zhì)的血清，絕對(duì)能成為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的“最強(qiáng)輔助”。

　　Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)：

　　1. 精選內(nèi)毒素更低批次（≤3EU/ml），原裝進(jìn)口。是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。

　　2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)，養(yǎng)細(xì)胞更放心。

　　3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實(shí)驗(yàn)室批號(hào)優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項(xiàng)目?jī)赡瓴恍钃Q批次，細(xì)胞試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

　　4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會(huì)有多批次平行供應(yīng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室專屬批號(hào)管理，保證供貨穩(wěn)定。

　　5. 為Ausbian血清用戶免費(fèi)提供申報(bào)支持，具有完整的檢測(cè)報(bào)告，為各類項(xiàng)目的申報(bào)提供支持（同時(shí)為血清VIP用戶在支原體檢測(cè)、方法學(xué)驗(yàn)證等方面，提供更多免費(fèi)延伸性技術(shù)幫助）。

　　6. 針對(duì)特殊科研項(xiàng)目，可提供3-5個(gè)平行批次，讓試驗(yàn)人有更多選擇空間。

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