細(xì)胞培養(yǎng)中“低調(diào)的高手”——馬血清

　　說(shuō)起細(xì)胞培養(yǎng)用的血清，大多數(shù)人都會(huì)想到胎牛血清、新生牛血清，對(duì)于馬血清卻知之甚少。今天就給大家介紹一下血清中“低調(diào)的高手”——馬血清。

　　一、馬血清作用

　　細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)的馬血清，經(jīng)過(guò)多次過(guò)濾，去除了許多大分子蛋白，但保留了血清中促細(xì)胞生長(zhǎng)的活性因子，表現(xiàn)出與胎牛血清和牛血清的類(lèi)似的特性，因而能用于細(xì)胞培養(yǎng)。

　　馬血清可以刺激成纖維細(xì)胞分化，以及細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 、細(xì)胞因子的合成。另外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞和心肌細(xì)胞、誘導(dǎo)生成樹(shù)突狀細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)均可用馬血清替代胎牛血清。

　　因此，馬血清通常適用于那些研究有絲分裂后，細(xì)胞關(guān)于生長(zhǎng)因子和激素等問(wèn)題的實(shí)驗(yàn)。或許，我們可以這樣說(shuō)，從現(xiàn)有研究來(lái)看，馬血清更適合用來(lái)研究特定種類(lèi)細(xì)胞的分化。

　　實(shí)際實(shí)驗(yàn)應(yīng)用方面：馬血清已被用作腦皮質(zhì)神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)的一種必添加物；大鼠的 PC12 細(xì)胞，在培養(yǎng)過(guò)程中，也需要在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加馬血清作為補(bǔ)充劑。

　　1. 馬血清可用于細(xì)胞培養(yǎng)和干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，例如：

　　（1）RPMI-1640培養(yǎng)液加馬血清培養(yǎng)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞。

　　（參考文獻(xiàn)：李春莉, 王建偉, 姜蓉, et al. 人參總皂苷誘導(dǎo)紅系血細(xì)胞增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[J]. 中國(guó)組織工程研究, 2009(23):4568-4572.）

　　（2）原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞。有人用含10%馬血清的DMEM，分離培養(yǎng)BALB/c小鼠原代腦神經(jīng)細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)和添加2%神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)劑B27的Neurobasal培養(yǎng)基相比，含10%馬血清的DMEM培養(yǎng)基更節(jié)省成本，方便廉價(jià)。

　　（參考文獻(xiàn)：李丹, 呂耀中, 王微,等. 兩種培養(yǎng)基分離培養(yǎng)BALB/c小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞方法的比較[C]// 中國(guó)北方實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技年會(huì). 遼寧省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì), 2015.）

　　（3）誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞向成肌細(xì)胞分化

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：劉杰,傅強(qiáng).馬血清在脂肪干細(xì)胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J].中國(guó)組織工程研究, 15(14)）

　　（4）培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞。與胎牛血清相比，馬血清對(duì)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的促增殖作用更好。

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：王改琴. 當(dāng)歸多糖對(duì)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞黏附分子表達(dá)及其黏附功能的影響[D]. 學(xué)位論文.重慶醫(yī)科大學(xué), 2008.）

　　（5）添加20%馬血清的L-DMEM培養(yǎng)液可誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：趙文靜，陳亞潔，劉薇.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2006.16(18):2744-2747）

　　2. 馬血清添加到微生物培養(yǎng)基中，可用于培養(yǎng)微生物，如：

　　（1）馬血清添加到培養(yǎng)基中用于支原體的培養(yǎng)。在《獸藥典》中，含馬血清的支原體培養(yǎng)基被用于獸用疫苗的支原體檢查。用KM2培養(yǎng)基(含馬血清)還可培養(yǎng)豬肺炎支原體。

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：胡茂志 焦新安,等.豬肺炎霉形體單克隆抗體的制備與鑒定.《中國(guó)獸醫(yī)科技》 2004年12期）

　　（2）馬血清加入到固體和液體培養(yǎng)基中，可用于培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌。并且，和羊血清和牛血清比較，添加馬血清的培養(yǎng)基更易于分裝和保存。

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：劉琳娜, 丁士剛, 張靜,等. 幾種培養(yǎng)幽門(mén)螺桿菌方法的比較[J]. 胃腸病學(xué), 2012, 017(004):240-241.）

　　3. 馬血清及激素可共同誘導(dǎo)建立家兔股骨頭缺血壞死的模型。

　　（文獻(xiàn)來(lái)源：洪嵩, 張?zhí)旌? 非創(chuàng)傷性股骨頭壞死模型的血液流變學(xué)及脂質(zhì)代謝[C]// 2009貴州骨科論壇.）

　　二、注意事項(xiàng)

　　與胎牛血清一樣，馬血清在使用過(guò)程中也應(yīng)注意幾個(gè)原則：

　　1、避免反復(fù)凍融；

　　2、三步法解凍，及時(shí)分裝；

　　3、配制好的完全培養(yǎng)基在4℃儲(chǔ)存不要超過(guò)7天。

　　還有一個(gè)大家比較關(guān)心的問(wèn)題，馬血清是否需要滅活？

　　我們都知道，胎牛血清由于特殊的采血時(shí)間（5-8月胎齡），牛胚胎體內(nèi)還沒(méi)有形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，因而不需要采用熱滅活的手段對(duì)補(bǔ)體進(jìn)行滅活。

　　而馬血清，在沒(méi)有特殊說(shuō)明的情況下，一般采自成年馬匹。作為脊椎動(dòng)物，成年馬也擁有完整的補(bǔ)體系統(tǒng)。

　　因而，如果所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中，涉及補(bǔ)體相關(guān)內(nèi)容，建議大家在使用前對(duì)馬血清進(jìn)行熱滅活，也可以直接購(gòu)買(mǎi)商品化的滅活馬血清。一些比較成功的實(shí)驗(yàn)案例中，所用到的馬血清，也是經(jīng)過(guò)熱滅活的。

　　相關(guān)實(shí)驗(yàn)請(qǐng)參考：

　　https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5111218/

　　Ausbian馬血清為細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)。它來(lái)自健康馬血液，為封閉系統(tǒng)內(nèi)無(wú)菌采血過(guò)濾而成，為淡黃色澄清液體，超低內(nèi)毒素，無(wú)溶血，無(wú)異物，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體、噬菌體等。

產(chǎn)品描述

　　1、每個(gè)批次均具有完整的檢測(cè)報(bào)告，其中含有下列檢測(cè)：

　　1）理化檢查

　　包括外觀、pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、內(nèi)毒素、蛋白顆粒度等

　　2）無(wú)菌檢查

　　含細(xì)菌真菌檢查、支原體檢查、噬菌體檢查，確保不含這些外源因子。

　　3）病毒檢查

　　牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）為陰性。

　　2、極低內(nèi)毒素。

　　3、提供試用，養(yǎng)細(xì)胞更安心。

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