10月16日,國(guó)際心臟研究學(xué)會(huì)官方雜志Journal of Molecular and Cellular Cardiology在線發(fā)表了中國(guó)科學(xué)院上海營(yíng)養(yǎng)與健康研究所楊黃恬研究團(tuán)隊(duì)題為“Human embryonic stem cell-derived cardiovascular progenitor cells stimulate cardiomyocyte cell cycle act...
內(nèi)參基因,也被稱為管家基因(house-keeping genes),是一類在生物體的各種組織和細(xì)胞中持續(xù)并穩(wěn)定表達(dá)的基因。這些基因的表達(dá)水平在不同樣本間相對(duì)穩(wěn)定,因此常被用作標(biāo)準(zhǔn)化樣本和校正實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的參照物,以消除實(shí)驗(yàn)中因上樣量、操作等因素產(chǎn)生的誤差,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。內(nèi)參基因的選擇對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。一個(gè)理想的內(nèi)參基因應(yīng)該具備以下特點(diǎn):在各種組織和細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定,不受生長(zhǎng)發(fā)...
qPCR技術(shù)(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)中的絕對(duì)定量與相對(duì)定量是兩種不同的定量方法,它們之間存在明顯的區(qū)別。以下是對(duì)這兩種定量方法的詳細(xì)比較:
一、定義與原理
絕對(duì)定量
定義:測(cè)定待測(cè)樣本中目的基因的準(zhǔn)確拷貝數(shù)。
原理:用已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測(cè)樣本目的基因的Ct值(循環(huán)閾值,即熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)閾值時(shí)所經(jīng)歷的擴(kuò)增循環(huán)數(shù))帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,進(jìn)而獲得樣本中目的基因的準(zhǔn)確拷貝數(shù)。
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qPCR(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)檢測(cè)支原體的判斷標(biāo)準(zhǔn)主要基于Ct值(循環(huán)閾值)以及熒光通道的信號(hào)情況。以下是一個(gè)詳細(xì)的判斷標(biāo)準(zhǔn):
一、Ct值判斷標(biāo)準(zhǔn)
Ct值是指熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)閾值時(shí)所經(jīng)歷的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。在qPCR檢測(cè)支原體時(shí),通常設(shè)定一個(gè)Ct值的判斷標(biāo)準(zhǔn)來(lái)區(qū)分陽(yáng)性結(jié)果和陰性結(jié)果。
陽(yáng)性結(jié)果:如果檢測(cè)的Ct值小于某個(gè)設(shè)定的閾值(如40),則表明PCR結(jié)果陽(yáng)性,即樣本中存在支原體DNA。
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熊本大學(xué)的研究人員通過(guò)在體外復(fù)制造血干細(xì)胞(hsc)的發(fā)育過(guò)程,在干細(xì)胞生物學(xué)方面取得了突破性進(jìn)展。這種培養(yǎng)系統(tǒng)不僅增強(qiáng)了我們對(duì)造血干細(xì)胞如何發(fā)育的理解,而且還導(dǎo)致了一種新工具的開發(fā),這種工具可能在未來(lái)的干細(xì)胞治療和血液疾病治療中發(fā)揮重要作用。造血干細(xì)胞(hsc)是人體一生中產(chǎn)生血細(xì)胞的主要來(lái)源,其發(fā)育經(jīng)歷了幾個(gè)階段。由分子胚胎學(xué)和遺傳學(xué)研究所的Minetaro Ogawa教授和Saori ...
支原體DNA抽提試劑盒是一種專門用于從樣本中提取支原體DNA的工具,它在生命科學(xué)研究和臨床診斷中發(fā)揮著重要作用。以下是對(duì)支原體DNA抽提試劑盒作用的詳細(xì)闡述:一、作用原理支原體DNA抽提試劑盒通過(guò)一系列化學(xué)反應(yīng)和物理操作,將樣本中的支原體DNA釋放出來(lái)并進(jìn)行純化。這些試劑盒通常包含裂解緩沖液、蛋白酶K、洗滌緩沖液、去離子水、Elution緩沖液等多種試劑,它們協(xié)同作用以完成DNA的提取過(guò)程。...
在細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、組織工程及藥物篩選等多個(gè)科研領(lǐng)域,細(xì)胞培養(yǎng)箱作為一種至關(guān)重要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,為細(xì)胞提供了一個(gè)體外生長(zhǎng)和增殖的模擬環(huán)境。這一環(huán)境不僅需要適宜的溫度和濕度,還需要精確調(diào)控的氣體比例,以確保細(xì)胞的健康生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。本文將深入探討細(xì)胞培養(yǎng)箱中氣體比例的調(diào)控原則、常見(jiàn)設(shè)定及其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。氣體比例的重要性細(xì)胞培養(yǎng)箱中的氣體比例,特別是氧氣和二氧化碳的濃度,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、...
在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,細(xì)胞凍存是一種重要的保存細(xì)胞活性的技術(shù)。這一過(guò)程中,二甲基亞砜(DMSO)作為抗凍保護(hù)劑,發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本文將深入探討DMSO在細(xì)胞凍存過(guò)程中的作用及其分子機(jī)制。DMSO的基本特性DMSO是一種無(wú)色、無(wú)味、高滲透性的液體,能夠迅速穿透細(xì)胞膜。其高度的滲透能力使其能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),與水分子結(jié)合,形成穩(wěn)定的溶液。這種特性使得DMSO成為理想的細(xì)胞凍存保護(hù)劑。DMSO在細(xì)胞...
在細(xì)胞生物學(xué)研究和臨床應(yīng)用中,細(xì)胞的長(zhǎng)期保存和復(fù)蘇是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。如何有效地保存細(xì)胞并保持其活性和功能,對(duì)于細(xì)胞治療、疾病研究以及藥物篩選等領(lǐng)域具有重大意義。而在細(xì)胞凍存與解凍的過(guò)程中,一個(gè)關(guān)鍵的原則就是“慢凍快融”。本文將探討這一原則背后的科學(xué)原理。慢凍:保護(hù)細(xì)胞免受冰晶損傷在細(xì)胞凍存過(guò)程中,降溫速度對(duì)細(xì)胞的存活率有著重要影響。如果直接將細(xì)胞暴露在極低的溫度下,如直接放入-196℃的液氮...
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)必須加入血清。原因主要有以下幾點(diǎn):
提供必需的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子:血清中含有多種細(xì)胞生存和增殖所必需的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子,這些因子對(duì)于細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分裂至關(guān)重要。
補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)成分:雖然合成培養(yǎng)基已經(jīng)包含了細(xì)胞所需的大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),但仍有一些成分可能不足或缺失。血清能夠補(bǔ)充這些缺失或不足的營(yíng)養(yǎng)成分,確保細(xì)胞能夠獲得全面的營(yíng)養(yǎng)支持。
提供貼壁生長(zhǎng)的基質(zhì)成分:對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),血清中含有一些...
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室里,大家對(duì)血清已經(jīng)不陌生了,但如何保存和正確的使用血清,避免那些讓人頭疼的沉淀問(wèn)題呢?今天我們就來(lái)探討一下,血清的正確使用方法。
儲(chǔ)存方式:未開封的血清,一般建議-20°C凍存。大瓶裝的血清如果一次用不完的話,建議無(wú)菌分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。,避免反復(fù)凍融。分裝后,再次冷凍前要確保血清均勻。若置于4°C的血清,應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證更好的細(xì)胞培養(yǎng)效果,血清和培養(yǎng)基的...
為什么說(shuō)選擇血清很重要呢!其中有一點(diǎn)很重要那就是內(nèi)毒素的含量。由于內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果影響較大,且不同批次的血清,內(nèi)毒素差異又不易控制。 有下列情況者,對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過(guò)提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),...
胎牛血清(Fetal Bovine Serum,F(xiàn)BS)作為細(xì)胞培養(yǎng)中用量**的天然培養(yǎng)基,其質(zhì)量和穩(wěn)定性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重要影響。為了確保胎牛血清的效能,低溫保存成為了一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。本文將詳細(xì)探討為何胎牛血清需要低溫保存,以及這一措施帶來(lái)的多方面益處。1. 抑制微生物生長(zhǎng),保持無(wú)菌性低溫環(huán)境能夠有效減緩或阻止細(xì)菌和其他微生物的生長(zhǎng)。胎牛血清在采集和處理過(guò)程中雖然經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌操作,但在...
在每個(gè)細(xì)胞內(nèi)部,被稱為微管細(xì)胞骨架的微絲網(wǎng)絡(luò)有助于維持細(xì)胞的形狀,允許細(xì)胞分裂,并將重要物質(zhì)從細(xì)胞的一個(gè)部分運(yùn)送到另一個(gè)部分。形成這個(gè)網(wǎng)絡(luò)的細(xì)絲被稱為微管,它們是中空的管,充當(dāng)支架結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸軌道。長(zhǎng)期以來(lái),科學(xué)家們一直對(duì)細(xì)胞如何控制這些微管的形成感到好奇,這是健康細(xì)胞功能和分裂所必需的過(guò)程。這是一個(gè)重要的問(wèn)題,因?yàn)槲⒐芤彩腔煔⑺腊┘?xì)胞的主要目標(biāo)。兩個(gè)研究小組,一個(gè)在生物醫(yī)學(xué)研究所(IRB ...
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,胰蛋白酶扮演著至關(guān)重要的角色,它負(fù)責(zé)細(xì)胞的消化和分離。然而,胰蛋白酶的活性必須得到精確控制,以避免對(duì)細(xì)胞造成過(guò)度損傷。在這一環(huán)節(jié),胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)以其獨(dú)特的生物化學(xué)特性,成為終止胰蛋白酶活性、保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)度消化的重要物質(zhì)。本文將深入探討胎牛血清如何發(fā)揮其作用,終止胰蛋白酶的活性,并終止細(xì)胞消化。胎牛血清的生物化學(xué)特性胎牛血清是通過(guò)...
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增過(guò)程中需要一種耐高溫的酶,這主要?dú)w因于PCR技術(shù)的特殊循環(huán)過(guò)程和對(duì)酶的特殊要求。以下是對(duì)這一需求的詳細(xì)解釋:一、PCR擴(kuò)增的循環(huán)過(guò)程
PCR擴(kuò)增主要包括三個(gè)步驟:高溫變性、低溫退火和中溫延伸。
高溫變性:DNA雙鏈在93℃左右的高溫下分離成單鏈,以便與引物結(jié)合。
低溫退火:溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列進(jìn)行配對(duì)結(jié)合。
中溫延伸:在70℃...
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中扮演著至關(guān)重要的角色,因此,對(duì)其進(jìn)行的病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也極為嚴(yán)格。以下是關(guān)于胎牛血清病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)解析:一、檢測(cè)項(xiàng)目胎牛血清的病毒檢測(cè)項(xiàng)目通常涵蓋一系列可能存在的病毒,包括但不限于:牛副流感3型病毒(PI-3)牛病毒性腹瀉病毒(BVD)牛細(xì)小病毒這些病毒一旦存在于血清中,將對(duì)宿主細(xì)胞造成嚴(yán)重的損害,甚至威脅實(shí)驗(yàn)人員的安全。二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)病毒檢測(cè)結(jié)果必須為陰性:對(duì)于上述提到的...
胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)作為細(xì)胞培養(yǎng)中的重要試劑,其質(zhì)量和穩(wěn)定性對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)和維持細(xì)胞功能至關(guān)重要。為了確保胎牛血清的活性和質(zhì)量不受損害,科學(xué)合理的儲(chǔ)存方法顯得尤為重要。其中,將胎牛血清儲(chǔ)存在-20攝氏度恒定溫度環(huán)境下,是確保其長(zhǎng)期保存有效性的關(guān)鍵措施。一、溫度對(duì)胎牛血清的影響溫度是影響胎牛血清儲(chǔ)存質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。長(zhǎng)期的溫度波動(dòng)可能導(dǎo)致血清中的蛋白質(zhì)發(fā)生...
在生命科學(xué)的發(fā)展歷程中,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)一直扮演著重要的角色。而胎牛血清,作為細(xì)胞培養(yǎng)中的重要添加劑,其應(yīng)用歷史和發(fā)展過(guò)程充滿了探索與創(chuàng)新。本文將詳細(xì)探討胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展歷程,從最初的探索到如今的廣泛應(yīng)用,以及未來(lái)可能的發(fā)展方向。起源與初步探索19世紀(jì)末至20世紀(jì)初,隨著生命科學(xué)的逐步發(fā)展,科學(xué)家們開始有了在體外培養(yǎng)細(xì)胞的想法。然而,當(dāng)時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)尚處于萌芽階段,科學(xué)家們對(duì)于如何維...
在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,核酸污染是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。無(wú)論是生物制藥、生物醫(yī)學(xué)研究、臨床檢測(cè),還是生物技術(shù)服務(wù),微量的核酸污染都可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果、產(chǎn)品質(zhì)量和安全性產(chǎn)生嚴(yán)重影響。因此,核酸污染祛除類試劑在這些企業(yè)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。一、保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性在生物醫(yī)學(xué)研究中,PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))等核酸擴(kuò)增技術(shù)是常用的實(shí)驗(yàn)手段。然而,微量的核酸污染便可能導(dǎo)致假陽(yáng)性擴(kuò)增結(jié)果,從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。...
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)核心技術(shù),用于擴(kuò)增特定的DNA或RNA片段。然而,由于其高度敏感性,PCR實(shí)驗(yàn)極易受到各種形式的污染,特別是核酸污染。核酸污染不僅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,還可能誤導(dǎo)后續(xù)的研究和分析。因此,在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí),必須高度警惕可能出現(xiàn)的核酸污染跡象,并采取相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施。一、需警惕的核酸污染跡象1. 非特異性擴(kuò)增非特異性擴(kuò)增是PCR實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的污染...
支原體檢測(cè)方法中,培養(yǎng)法和PCR法各有其優(yōu)缺點(diǎn),準(zhǔn)確性也受多種因素影響,因此無(wú)法一概而論哪種方法更準(zhǔn)確。
培養(yǎng)法是一種經(jīng)濟(jì)可靠的方法,通過(guò)培養(yǎng)基上的細(xì)胞培養(yǎng)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和變化,可以準(zhǔn)確地檢測(cè)出支原體感染。然而,由于支原體的生長(zhǎng)緩慢,培養(yǎng)法的實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng),通常需要幾周甚至幾個(gè)月的時(shí)間。此外,培養(yǎng)法對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的要求較高,需要專業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行操作。這些因素限制了培養(yǎng)法的快速應(yīng)用和廣泛普及...
在開創(chuàng)性的藥物開發(fā)中,能夠輕松快速編輯負(fù)責(zé)藥物功效的關(guān)鍵原子的新技術(shù)被視為一項(xiàng)基礎(chǔ)和“夢(mèng)想”技術(shù),徹底改變了發(fā)現(xiàn)潛在候選藥物的過(guò)程。韓國(guó)科學(xué)技術(shù)院(KAIST)的研究人員在世界上**成功開發(fā)出了使藥物效果**化的單原子編輯技術(shù)。8日,韓國(guó)科學(xué)技術(shù)院表示,化學(xué)學(xué)系樸允秀教授研究組成功開發(fā)出了將呋喃化合物中的氧原子編輯為氮原子,直接轉(zhuǎn)化為制藥領(lǐng)域廣泛使用的吡咯骨架的技術(shù)。 該研究在10月3日的權(quán)...
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)在科學(xué)研究中扮演著至關(guān)重要的角色,然而,其結(jié)果的重復(fù)性問(wèn)題一直是科研人員面臨的重大挑戰(zhàn)。據(jù)Nature reviews drug discovery上的一篇分析顯示,已發(fā)表的臨床前研究(主要基于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果)中,僅有21%的結(jié)果可以完全重復(fù),這反映了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的極大不穩(wěn)定性。本文將探討細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)率低的原因,并提出相應(yīng)的解決方案。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)率低的原因1. 細(xì)胞和培養(yǎng)條件的差異:細(xì)胞試...
T細(xì)胞免疫療法已經(jīng)成功地治療了一些難治性癌癥,但由于T細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)間刺激后無(wú)法持續(xù)存在,因此存在局限性。St. Jude兒童醫(yī)院的研究人員采用了一種反向翻譯的方法來(lái)探究調(diào)節(jié)T細(xì)胞對(duì)檢查點(diǎn)阻斷免疫療法反應(yīng)持久性的分子機(jī)制。受骨髓增生異常綜合征患者臨床觀察的啟發(fā),利用T細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)?zāi)P痛_定了與克隆性造血( clonal hematopoiesis)相關(guān)的表觀遺傳調(diào)節(jié)因子——Dnmt3a、Tet2和...